原代细胞冻存的方法

（1）原代细胞选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)。
 
（2）去上清液，加入含20%小牛血清的*培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为5×106～1×107/mL之间。（冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择，像有些科研君们就用corning胎牛血清,也有人用sigma的小牛血清）
 
（3）将分装上述细胞悬液于2ml冻存管中，每管0.25ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记好原代细胞名称和冻存日期，同时作好登记（日期、细胞种类及代次、冻存支数）。
 

（4）将装好细胞的冻存管放到冻存盒中，-80℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐);或者可以在4℃，2h;然后转到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐。

（5）原代细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。