干细胞转染液的配制

干细胞转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。那么具体的实验方法是什么呢？小编百思不得其解！费了好大劲去请教了技术老师，好东西大家要一起分享，于是今天小编决定把细胞转染技术以HeLa细胞为例整理出来，分享给大家。

HeLa细胞传代入24孔板3个孔，1ml10％FBS胎牛血清的DMEM培养，密度以使其第2天能生长至70％左右面积为宜。

1.转染液的配制：

A液：2×1µl lipofectamine Gibco 滴入 2×50µl无血清培基中，混匀后静置。

B液：9.36µl MMP14-siRNA (4рmol/μl) 和9.36µlβ－gal-siRNA (4рmol/μl)分别与50µl无血清培基混匀后静置。

2、待A液静置5分钟时，取50µlA液分别滴入B液的两组中。混匀，静置15分钟时，开始准备细胞。

3、弃掉原细胞培养液，用2ml 1×PBS加入培养皿中，前后左右倾斜培养皿，洗细胞一次，尽量吸净PBS。转染混合液中分别补100µl无血清培养基混匀，马上滴入洗好的细胞上。静置约2分钟，放入37℃孵箱中。另设细胞阴性对照组，只用无血清培基处理。

4、转染后4小时，补800ml 15％FBS的DMEM，放入37℃孵箱中。

6.转染后70小时准备侵袭实验。步骤见*部分，不同之处在于Matrigel为1mg/ml 30µl。

7.干细胞侵袭实验观察12小时后，取出染色。
鉴别    泛影酸    100021-198102    对照品        200mg
HPLC法含量测定    格隆溴铵（曾用名：甘罗溴铵）    100022-200403    对照品        100mg
鉴别    谷氨酸    100023-198601    对照品        50mg
检查    磺胺    100024-198702    对照品        50mg
含量测定    磺胺甲噁唑     100025-199503    对照品        50mg
HPLC法含量测定    磺胺嘧啶    100026-200402    对照品        100mg
含量测定    炔诺孕酮    100028-199907    对照品        100mg
含量测定    甲萘醌    100029-200009    对照品        50mg
检查    甲巯咪唑    0030-200504    对照品        100mg
HPLC法含量测定用    甲氧苄啶    100031-200304    对照品        100mg
含量测定    己酸羟孕酮    100032-198501    对照品        50mg
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