上海机纯实业有限公司
产地 | 国产 | 加工定制 | 是 |
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适用领域 | 科研 |
Hs68细胞是我公司重点推广产品,我们有专业的技术人员全程指导,请放心购买,发货时均会附上质检报告单、使用说明书和*用法用量,提供正规发票。
Hs68细胞
细胞介绍
该细胞 1969年由OwensRB建立。
细胞特性
1 来源:人正常
2 形态 :成纤维细胞样,贴壁生长
3 含量:>1x10 6 个/mL
4 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5 规格:T25 瓶或者 1mL 冻存管包装运输和保存 :可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
Hs68细胞细胞用途:仅供科研使用。
细胞培养步骤
一. 培养基 及 培养 冻存 条件准备:
1)准备 D/F12 培养基(D/F12,GIBCO,货号 C11330500BT);北美胎牛血清(UnitedStates,GIBCO,货号 16000-044),20%;双抗 1%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37 摄氏度,培养湿度为 70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞 处理 :
1) 复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养或将细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面 T25 瓶为例;
1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗瓶底 1-2 次后加入 1ml *,细胞变圆脱落后,加入 2ml *培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2.1000RPM 离心 5 分钟去掉上清。用血清重悬浮,加 DMSO 至zui终浓度为10%。加入 DMSO 后迅速混匀,按每 1ml 的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于 1X10 6 个细胞冻存。
3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,至少 2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项:
1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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