人源细胞培养常用试剂

人源细胞培养常用试剂
一、 PBS 磷酸缓冲盐溶液（一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）

PBS 1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)：0.27g，

*(Na2HPO4)：1.42g，

加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，

zui后定容到1L

高温高压灭菌后置于4摄氏度冰箱保存待用。

（一般情况下，现配现用，易变质暴露在空气中）

二、 细胞消化液

0.25%*-0.02%EDTA的配制

配方：100ml PBS,0.25g*

步骤：

1、先配100mlPBS

2、称*0.25g

3、加入PBS中，低速搅拌 <4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h冰浴中(储存-20摄氏度冰箱中，使用保存4摄氏度)

4、调PH7.4

5、仍在冰浴中

6过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完

Tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。低温，防止酶失活

对难消化的人源细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)

Tip:因为EDTA可以络合Ca2 ，增加消化效力

注意事项：

1、*是0.25%,这是质量体积比，就是说0.25g*溶于100ml PBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。

2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用*培养基终止消化后，可离心弃上清，再加*培养基培养，可去除EDTA。如果对贴壁没影响，那么可不离心。

3、EDTA的浓度也是质量体积比。和*一起溶于PBS。

4、注意，血清可终止*的作用，但不能终止EDTA的作用，对有些细胞来说，终止消化后的离心是必要的。

5、*和EDTA在pH 为8左右的时候zui易溶解，在配制时可先滴几滴NaOH将pH调至8，注意，*可使溶液变酸，所以要边溶边测pH，随时调整。注意，不可加过量NaOH，否则过碱，细胞会*。

6、*EDTA相对比较难溶，可用磁力搅拌器，或放入4度冰箱过夜，待溶解后过滤除菌。

7、可配2－3乘的*，这样比较节约时间和滤器，用的时候对上灭菌PBS即可。

8、储存液放在－20度冰箱冻存，使用液放在4度，用的时候不要放在27度水浴锅温浴，因为这样会让*很快失效，使用前放在室温下一会，因为加的量很少，所以一般不会冻坏细胞。

9、消化时，向培养瓶中加入适量*，个人经验，一般10cm培养皿加入0.5ml足已，加入后，立刻摇晃培养皿，使*铺满，一旦铺满，立刻用*吸去多余的*，再放入37度培养箱消化。

10、注意，过量的*对细胞是有害的，而EDTA过多也会影响贴壁，所以没必要把细胞泡在*里面消化。

11、*37摄氏度消化效果，低于37度也有消化能力，有些容易消化的细胞在消化时甚至不需要放入培养箱。注意，不可消化过久。

三、细胞培养基

人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞

培养基RPMI 1640 培养基/DMEM培养基

肝癌细胞HepG-2细胞培养基

人源细胞DMEM培养液(含100 U/ml-*、100 U/ml*、10%新生牛血清