Y1HGold 感受态细胞 100ul*50-生命科学仪器 返回列表页

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培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
操作方法：
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

shēng huà shì jì DL-苯* 容量： 1公斤

shēng huà shì jì DL-苯甘氨醇 容量： 100克

shēng huà shì jì DL-苯* 容量： 1公斤

shēng huà shì jì DL-半*盐酸盐一水物 容量： 100克

shēng huà shì jì DL-半* 容量： RT，避光 5克

shēng huà shì jì DL-α-* 容量： RT 10克

shēng huà shì jì DL-4-羟基-3-甲氧基扁桃酸 容量： 5克

shēng huà shì jì DL3000 DNA Marker 容量： 5克

shēng huà shì jì DL-2-氨基丁酸 容量： 1公斤

shēng huà shì jì DL2000 DNA Marker 容量： RT 1克

shēng huà shì jì DG-18琼脂 容量： 2～8℃ 25毫升

shēng huà shì jì DEAE纤维素DE-52 容量： 2～8℃ 10毫克

shēng huà shì jì DEAE纤维素DE-32 容量： 25毫升

shēng huà shì jì DEAE纤维素DE-23 容量： 5毫升

Y1HGold 感受态细胞 100ul*50shēng huà shì jì DEAE纤维素 容量： 2～8℃ 1毫升

shēng huà shì jì DEAE琼脂糖凝胶FF 容量： 250毫克

shēng huà shì jì DEAE琼脂

MA, 小鼠星形胶质细胞

MLF, 小鼠淋巴成纤维细胞

mRTEC, 小鼠肾小管上皮细胞

CSC, 小鼠心肌细胞

mEPC, 小鼠内皮祖细胞-骨髓

MEF, 小鼠胚胎成纤维细胞

NSC，大鼠神经干细胞

RN-h, 大鼠海马趾神经元

rEPC，大鼠内皮祖细胞-骨髓

RN-c, 大鼠皮质神经元

RN-s, 大鼠纹状体神经元

RSC, 大鼠雪旺细胞

RA, 大鼠星形胶质细胞

RLF, 大鼠淋巴成纤维细胞

rRTEC, 大鼠肾小管上皮细胞

rCSC, 大鼠心肌细胞

RDFs, 大鼠真皮成纤维细胞

RLFs, 大鼠肺成纤维细胞

rCF, 大鼠心脏成纤维细胞

MN-h, 小鼠海马神经元

MN-s, 小鼠纹状体神经元

mOPC, 小鼠少突胶质前体细胞

MA, 小鼠星形胶质细胞

MLF, 小鼠淋巴成纤维细胞

mRTEC, 小鼠肾小管上皮细胞

CSC, 小鼠心肌细胞

小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）

MEF, 小鼠胚胎成纤维细胞

MM, 小鼠小胶质细胞

mCF, 小鼠心脏成纤维细胞

MN-c, 小鼠皮质神经元

 细胞名称

人绒毛膜毛细血管内皮细胞

人羊膜上皮细胞

人绒毛间充质成纤维细胞

人羊膜间充质基质细胞

人绒毛膜间充质基质细胞

容量： 3000U

shēng huà shì jì DEAE葡聚糖凝胶A-50 容量： 5KU

注意事项:

1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤：
1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100        μl感受态细胞能够被1         ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟
4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。