GV3101 感受态细胞 100ul*50-生命科学仪器 返回列表页

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培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
操作方法：
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

FSA 人胚胎性硫糖蛋白抗原 规格： 48T/96T

 CIAP 人牛小肠碱性磷酸酶 规格： 48T/96T

 FⅫ 人*Ⅻ 规格： 48T/96T

 FⅩⅢ 人*ⅩⅢ 规格： 48T/96T

 FⅩ 人*Ⅹ 规格： 48T/96T

 FⅨ 人*Ⅸ 规格： 48T/96T

 Ⅷ-Ag 人*Ⅷ相关抗原 规格： 48T/96T

 FⅢ 人*Ⅲ 规格： 48T/96T

 FⅡ 人*Ⅱ 规格： 48T/96T

 F1+2 人*原片段F1+2 规格： 48T/96T

 T-TM 人*血栓调节蛋白复合物 规格： 48T/96T

 TR 人*受体 规格： 48T/96T

 TAT 人*抗*复合物 规格： 48T/96T

 Gelsolin 人凝溶胶蛋白 规格： 48T/96T

 CLU 人凝聚素 规格： 48T/96T

 gelson 人凝胶原蛋白 规格： 48T/96T

 UFC 人尿游离* 规格： 48T/96T

 ALB 人尿微量白蛋白 规格： 48T/96T

 UreC 人尿素酶相关蛋白C 规格： 48T/96T

 PLAUR/uPAR 人*型纤溶酶原激活物受体 规格： 48T/96T

 uPA/PLAU 人*型纤溶酶原激活物 规格： 48T/96T

 uPA/PLAU 人*型纤溶酶原激活物 规格： 48T/96T

 uPA 人*型纤溶酶原激活物 规格：

shēng huà shì jì 核糖核酸酶（牛胰） 容量： 25克

shēng huà shì jì 核糖核酸（酵母） 容量： RT 5克

GV3101 感受态细胞 100ul*50shēng huà shì jì 核酸组蛋白（小牛胸腺） 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 含铁牛奶培养基 容量： 100克

shēng huà shì jì 海藻糖无水物 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 海藻酸钠 容量： 25克

shēng huà shì jì 海藻酸 容量： 100克

shēng huà shì jì 海砂 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 过氧化物酶染液 容量： 10片/箱

shēng huà shì jì 过氧化物酶（辣根） 容量： 5克

shēng huà shì jì 过氧化氢尿素 容量： 500克

shēng huà shì jì 过氧化氢酶测试盒 容量： RT 20个/包

shēng huà shì jì 过氧化氢酶（牛肝） 容量： 1公斤

48T/96T

注意事项:

1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤：
1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100        μl感受态细胞能够被1         ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟
4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。