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产品名称 | Y2HGold 感受态细胞 100ul*50 |
包装 | 100ul*50 |
分类 | 酵母感受态细胞 |
培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
操作方法:
1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
shēng huà shì jì CCDA添加剂 容量: RT 1张
shēng huà shì jì CCDA基础 容量: 500毫升
shēng huà shì jì CBZ-* 容量: 100克
shēng huà shì jì CBZ-L-* 容量: 100克
shēng huà shì jì CBZ-L-天冬氨酸 容量: 100克
shēng huà shì jì CBZ-L-* 容量: 1公斤
shēng huà shì jì CBZ-L-* 容量: 1公斤
Y2HGold 感受态细胞 100ul*50shēng huà shì jì CBZ-L-* 容量: RT 1克
shēng huà shì jì CBZ-L-羟* 容量: RT 1克
shēng huà shì jì CBZ-L-* 容量: 100克
shēng huà shì jì CBZ-L-焦* 容量: RT 5克
shēng huà shì jì CBZ-L-* 容量: 5克
shēng huà shì jì CBZ-L-* 容量: 2~8℃ 1克
shēng huà shì jì CBZ-L-苯* 容量: 25克
shēng huà shì jì CBZ-D-* 容量: 1公斤
shēng huà
MCF-7(MCF7)(ATCC来源), 人乳癌细胞
MDA-MB-231(ATCC来源), 人乳癌细胞
Raji,人Burkitt's淋巴瘤细胞
Saos-2,人成骨肉瘤细胞
Caco-2,人结直肠腺癌细胞
NCI-N87 [N87]人胃癌细胞
MGC80-3(MGC-803)人胃癌细胞
EC109,人食管癌细胞
HGC-27人胃癌细胞
AGS人胃腺癌细胞
U251人胶质瘤细胞
THP-1人单核白血病细胞
HuH-7人肝癌细胞
RBE, 人肝胆管癌细胞
MiaPaCa-2, 人胰腺癌细胞
KM3, 人多发性骨髓瘤细胞
QGY-7701, 人肝癌细胞
PANC-1, 人胰腺癌细胞
U266B1 [U266], 人多发性骨髓瘤细胞
Hep G2, 人肝癌细胞系
PC-12(高分化),PC12,大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株(高分化)
GH3, 大鼠垂体生长激素腺瘤
Hepa 1-6, 小鼠肝癌细胞
QBC-939, 人胆管癌细胞
D-天冬氨酸 容量: RT 5克
shēng huà shì jì CBZ-D-* 容量: 25克
注意事项:
1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤:
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3.42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟
4.每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
5.根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
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