EHA101 感受态细胞 100ul*100-生命科学仪器 返回列表页

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培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
操作方法：
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

 17-OHP 人17羟孕酮 规格： 48T/96T

 17-OHCS 人17羟皮质类固醇 规格： 48T/96T

 16-α OHE-1 人16α羟基雌酮1 规格： 48T/96T

 15-LO/LOX 人15脂加氧酶 规格： 48T/96T

 12-HETE 人12羟二十烷四烯酸 规格： 48T/96T

 11-DH-TXB2 人11去氢血栓烷B2 规格： 48T/96T

 1,3-βD glucosidase 人1,3-βD葡葡糖苷酶 规格： 48T/96T

  OH 人1,25二羟基*3 规格： 48T/96T

 HIS 犬组胺 规格： 48T/96T

 TGF-β1 犬转移生长因子β1 规格： 48T/96T

 MHC/DLA 犬主要组织相容性复合体 规格： 48T/96T

 PROG 犬孕激素/孕酮 规格： 48T/96T

EHA101 感受态细胞 100ul*100 HBsAg 犬乙型肝炎表面抗原 规格： 48T/96T

 AChRab 犬乙酰*受体抗体 规格： 48T/96T

 ISR-β 犬胰岛素受体β 规格： 48T/96T

 INS 犬胰岛素 规格： 48T/96T

 FA 犬* 规格： 48T/96T

 TXB2 犬血栓素B2 规格： 48T/96T

 TpP 犬血栓前体蛋白 规格： 48T/96T

 TM 犬血栓调节蛋白 规格： 48T/96T

 Thymosin α1 犬*α1 规格：

 jì Na-对甲苯磺酰-L-苯*氯甲基酮 容量： 25毫升

shēng huà shì jì Na-苯甲酰-L-精氨酰胺盐酸盐 容量： 25毫克

shēng huà shì jì Na-苯甲酰-L-*乙酯盐酸盐 容量： 1克

shēng huà shì jì NAC琼脂培养基 容量： RT 25克

shēng huà shì jì N6-异戊烯基腺嘌呤 容量： 保存：-20℃ 1克

shēng huà shì jì N6-苯甲酰基腺嘌呤 容量： 5克

shēng huà shì jì N，N-二异丙基碳二亚胺 容量： 2～8℃ 5克

shēng huà shì jì N,N-二乙基甲酰胺 容量： 50毫克

shēng huà shì jì N,N-二甲基乙酰胺 容量： 2～8℃ 5毫克

shēng huà shì jì N，N-二环己基碳二亚胺 容量： 500克

shēng huà shì jì N,N,N,N-四甲基乙二胺 容量： 保存：-20℃，避光 25毫克

shēng huà shì jì N-（γ-L-谷氨酰）-2-萘胺 容量： RT 25克

shēng huà shì jì N-（γ-L-谷氨酰）-1-萘胺 容量： 500克

shēng huà shì jì N-(2-乙酰胺基)-2-亚氨基二乙酸 容量： 保存：-20℃ 10次/30ul/支

shēng huà shì jì N-(2-乙酰氨基)-亚氨基二乙酸二钠盐 容量： 30次/100ul/支

shēng huà shì jì N-（2-乙酰氨基）-2-氨基乙烷磺酸 容量： 保存：-20℃ 20次/160ul/支

shēng huà shì jì M-肉汤 容量： 500克

shēng huà shì jì mTSB肉汤 容量： 25克

shēng huà shì jì M-TGE肉汤 容量： 500毫升

shēng huà shì jì M-TEC琼脂 容量： 2～8℃ 25毫升

shēng huà shì jì MR-VP培养基 容量： 100克

注意事项:

1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤：
1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100        μl感受态细胞能够被1         ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟
4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。