Origami2（DE3） 感受态细胞 100ul*50-生命科学仪器 返回列表页

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培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
操作方法：
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

 TSA 人肿瘤特异性抗原 规格： 48T/96T

 TSGF 人肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子 规格： 48T/96T

 TRANCE 人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子 规格： 48T/96T

 TRAIL-R4 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4 规格： 48T/96T

 TRAIL-R3 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3 规格： 48T/96T

 TRAIL-R1 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1 规格： 48T/96T

 TNFsR-Ⅱ 人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ 规格： 48T/96T

 TNFsR-Ⅰ 人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ 规格： 48T/96T

 TNF-β 人肿瘤坏死因子β 规格： 48T/96T

 TACE 人肿瘤坏死因子α转化酶 规格： 48T/96T

 TACE 人肿瘤坏死因子α转化酶 规格： 48T/96T

 TNF-α 人肿瘤坏死因子α 规格： 48T/96T

Origami2(DE3) 感受态细胞 100ul*50 CA724 人肿瘤标志物 规格： 48T/96T

 NAP-2/CXCL7 人中性粒细胞趋化蛋白2 规格： 48T/96T

 NGAL 人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 规格： 48T/96T

 NAP 人中性粒细胞碱性磷酸酶 规格： 48T/96T

 NE 人中性粒细胞弹性蛋白酶 规格： 48T/96T

 MK 人中期因子 规格： 48T/96T

 LXA4 人脂氧素A4 规格： 48T/96T

 LTA 人脂磷壁酸 规格： 48T/96T

 ADP 人脂联素 规格： 4

 shēng huà shì jì 葡聚糖T200 容量： 保存：-20℃ 500u

shēng huà shì jì 葡聚糖T20 容量： 保存：-20℃ 200u

shēng huà shì jì 葡聚糖T110 容量： 保存：-20℃ 500u

shēng huà shì jì 葡聚糖T11 容量： 10KU

shēng huà shì jì 葡聚糖T1000 容量： 2000u

shēng huà shì jì 葡聚糖T100 容量： 2500u

shēng huà shì jì 葡聚糖T10 容量： 保存：-20℃ 1000U

shēng huà shì jì 葡聚糖 容量： 2～8℃ 500U

shēng huà shì jì 破伤风梭菌培养基基础 容量： 100克

shēng huà shì jì 苹果酸脱氢酶测试盒（测组织） 容量： 100支/包

shēng huà shì jì 苹果酸脱氢酶测试盒（测血清） 容量： 500支/包

shēng huà shì jì 苹果酸脱氢酶 容量： 2～8℃，避光 1克

shēng huà shì jì 苹果酸钠三水物 容量： 2～8℃ 5克

shēng huà shì jì 苹果酸钠 容量： 500克

shēng huà shì jì 平板计数琼脂 容量： 100克

8T/96T

注意事项:

1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤：
1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100        μl感受态细胞能够被1         ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟
4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。