JM109 感受态细胞 100ul*20-生命科学仪器 返回列表页

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培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
操作方法：
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

 OPG 大鼠骨保护素 规格： 48T/96T

 GAD-Ab 大鼠*脱羧酶自身抗体 规格： 48T/96T

 OFQ/N 大鼠孤腓肽 规格： 48T/96T

 Lebtospira 大鼠钩端螺旋体IgG 规格： 48T/96T

 T 大鼠睾酮 规格： 48T/96T

 u-T4 大鼠高敏甲状腺素 规格： 48T/96T

 U-TSH 大鼠高灵敏度促甲状腺激素 规格： 48T/96T

 HGF 大鼠肝细胞生长因子 规格： 48T/96T

 SCFR 大鼠干细胞因子受体 规格： 48T/96T

 SCF/MGF 大鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子 规格： 48T/96T

 IP-10/CXCL10 大鼠干扰素诱导蛋白10 规格： 48T/96T

 CR 大鼠钙结合蛋白 规格： 48T/96T

 CAM 大鼠钙调素 规格： 48T/96T

 CaN 大鼠钙调磷酸酶 规格： 48T/96T

 CAMK 2 大鼠钙/钙调素依赖性蛋白激酶2 规格： 48T/96T

 CPSA 大鼠复合前列腺特异性抗原 规格： 48T/96T

 sIgA 大鼠分泌型免疫球蛋白A 规格： 48T/96T

 SP-A 大鼠肺表面活性物质相关蛋白A 规格： 48T/96T

 DPPⅣ 大鼠二肽基肽酶Ⅳ 规格： 48T/96T

 CA 大鼠儿茶酚胺 规格： 48T/96T

 DAT 大鼠多巴胺转运蛋白 规格： 48T/96T

 D2R 大鼠多巴胺D2受体 规格： 48T/96T

 D1R 大鼠多巴胺D1受体 规格： 48T/96T

 D1R 大鼠多巴胺D1受体 规格： 48T/96T

 DA 大鼠多巴胺 规格： 48T/96T

 TE 大鼠端粒酶 规格： 48T/96T

 M-AChR 大鼠毒蕈碱型乙酰*受体 规格： 48T/96T

 AZT 大鼠* 规格： 48T/96T

 AIF 大鼠凋亡诱导因子 规格：

3-氨基-2-甲基吡啶 3430-10-2

5-溴-2-甲基吡啶 3430-13-5

3-氨基-6-甲基吡啶 3430-14-6

3-溴-5-甲基吡啶 3430-16-8

2-溴-3-甲基吡啶 3430-17-9

2,5-二溴-3-甲基吡啶 3430-18-0

3-氨基-5-甲基吡啶 3430-19-1

4-甲基-3-溴吡啶 3430-22-6

3,5-二溴-4-甲基吡啶 3430-23-7

3-氨基-4-甲基吡啶 3430-27-1

3-氯-4-氟环己醇 34328-61-5

2-哌啶甲醇 3433-37-2

S-叔丁基亚磺酰胺 343338-28-3

2-溴溴苄 3433-80-5

D-* 344-25-2

5-溴-2-硝基三氟甲苯 344-38-7

2-氯-3-硝基吡啶 34515-82-7

5-溴茚酮 34598-49-7

2,5-二溴硝基苯 3460-18-2

4-溴苯甲砜 3466-32-8

2,7-二甲氧基萘 3469-26-9

4-碘吡唑 3469-69-0

6-羟基-1-四氢萘酮 3470-50-6

JM109 感受态细胞 100ul*20醋酸甲脒 3473-63-0

2-氟苯胺 348-54-9

3,4-二氟溴苯 348-61-8

碳酸锌 3486-35-9

8T/96T

注意事项:
1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤：
1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100        μl感受态细胞能够被1         ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟
4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。