原代细胞增殖效应？

原代细胞构建重组质粒, 采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法、Western blot、MTT法、流式细胞术(FCM)分别检测转染后K562细胞中 bcr/abl融合基因、bcr/abl融合蛋白的表达水平、细胞生长增殖变化及细胞凋亡率, 探索该基因的沉默表达对K562细胞的抑制作用。结果表明, 该实验成功构建出能明显下调Shp2基因及其蛋白表达的重组质粒, 转染K562细胞后, 其bcr/abl融合基因及融合蛋白水平均明显降低、K562细胞增殖活力被抑制(P<0.05)、细胞凋亡水平上升(P<0.05)。与对照组相比, 其差异具有统计学意义。提示, 重组质粒可显著降低bcr/abl基因及蛋白的表达, 抑制K562细胞的生物学效应, 表明在细胞水平沉默 Shp2有可能成为治疗慢性粒细胞白血病的有效靶点。

慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)是Z常见的骨髓增生性疾病, 占成人白血病诊断病例的15%。其发病机制是t(9; 22)(q34; ql1)易位形成Ph染色体, 表达bcr/abl融合基因并翻译成具有酪氨酸激酶活性的bcr/abl融合蛋白, 该蛋白可激活细胞内多种信号传导通路, 导致白细胞在体内恶性增殖。目前, CML的治疗方法主要是采用酪氨酸激酶抑制剂来针对bcr/abl进行靶向治疗, 但有部分病人对此类药物可产生耐药。

因此, 探索基于其他机制的治疗方法具有重要的现实意义。近年研究发现, Shp2基因已被确认为与人类白血病及其它肿瘤相关的蛋白酪氨酸磷酸酶细胞原癌基因。而作为原癌基因, 其表达量在CML细胞中显著升高。同时研究也证实, 慢性粒细胞白血病致癌基因bcr/abl 转化造血细胞需要Shp2介导。因此, 本实验拟通过 RNA干扰技术沉默Shp2基因, 原代细胞探索该基因的沉默表达对慢性髓细胞白血病K562细胞株的抑制效应, 旨在为寻找治疗CML的有效靶点奠定基础。
HPLC≥98%    Pectolinarin    大蓟苷（柳穿鱼叶苷）    20mg/支
HPLC≥98%    2"-O-galloylhyperin    2”-O-没食子酰基金丝桃苷    20mg/支
HPLC≥98%    9-methoxycamptothecine    9-甲氧基喜树碱    20mg/支
HPLC≥98%    Lycorine chloride    盐酸石蒜碱    20mg/支
HPLC≥98%    Glabridin    光甘草定    20mg/支
HPLC≥98%    aurantio-obtusin    橙黄决明素    20mg/支
HPLC≥98%    Nuciferine    荷叶碱    20mg/支
HPLC≥99%    Biochanin A    鹰嘴豆芽素A    20mg/支
HPLC≥99%    10-hydroxycamptothecin    10-羟基喜树碱    20mg/支
≥99%    Theobromine    可可碱    20mg/支
95%    D-Pinitol    D-松醇    20mg/支
HPLC≥98%    Hederagenin    常春藤皂苷元    20mg/支
原代细胞