ATCC细胞转化操作流程

1、 ATCC细胞在冰上预冷2支14-ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管。1支用来转化样品，1支做pUC18对照。同时将NZY+ broth培养基在42°C预热。
2、 冰上融化感受态细胞。融化时轻轻将细胞混匀并分装成100ul/管。
3、 每管中加入随试剂盒提供的4 ml b-ME（巯基乙醇）。
4、 温和转动试管，将细胞在冰上放置10分钟，每2分钟温和转动一下。
5、 每管细胞加入0.1–50 ng样品DNA （或2 ml连接反应物）（参见DNA 质量与体积说明。）用灭菌dH2O水按1:10稀释对照pUC18 DNA，并取1 ml稀释的pUC18 DNA加入转化细胞。
6、 温和转动试管，并在冰上放置30分钟。
7、 试管在42°C水浴热激30秒。热激时间对转化效率极度重要。
8、 试管冰浴2 分钟。
9、 每管加入0.9 ml 预热 （42°C） 的NZY+ 肉汤，37°C、225–250 rpm 摇床培养1 小时。
10、 取 200 ml转化混和物铺带有相应筛选抗生素的LB琼脂糖平板（如果进行颜色筛选还需加入IPTG和X-gal）。pUC18阳性对照则取5 ml 铺氨苄青霉素LB琼脂糖平板。
注意：细胞经 1000 rpm离心 10分钟会聚集，应将细胞沉淀用 200 *l NZY+ 肉汤重悬。如果用于铺板的细胞 <100 ml，先将细胞加入200 ml培养基中，然后用灭菌涂布棒铺板。如果采用?100 ml细胞则可以直接铺板。倾斜涂布棒并轻轻拍打，尽量减少涂布棒上的细胞残留。
11、 37°C培养过夜。颜色筛选请参见以下Blue-White Color Screening的操作指南。
12、 pUC18阳性对照预计有约250个克隆（?5 × 109 cfu/mg pUC18 DNA）。而ATCC细胞样品DNA的转化效率随DNA的量和组成（超螺旋或连接产物）有较大差异，大质粒和非超螺旋DNA往往得到较少的克隆。
中药对照药材    鹤虱    2.0g    中药对照药材
中药对照药材    蟾酥    0.2g    中药对照药材
中药对照药材    松叶    10.0g    中药对照药材
中药对照药材    人参芦头    0.5g    中药对照药材
中药对照药材    广藿香    1.0g    中药对照药材
中药对照药材    山麦冬    1.0g    中药对照药材
中药对照药材    山药    2.0g    中药对照药材
中药对照药材    山楂（山里红）    3.0g    中药对照药材
中药对照药材    天冬    1.0g    中药对照药材
中药对照药材    毛冬青    1.5g    中药对照药材
ATCC细胞