原代细胞悬液的制备

（1）原代细胞机械法
    1）用剪刀剪碎或者用锋利的解剖刀剁碎组织；
    2）将剪碎的组织加入匀浆器中匀浆；
    3）用吸管或注射器抽吸细胞悬液，以分散细胞；
    将细胞悬液在尼龙网或不锈钢网上过滤，滤出的细胞悬液细胞计数后即可使用。
    （2）酶处理法  此法是实体组织分散为单个细胞的主要方法。由于不同酶对细胞内和细胞间不同组分有特异消化作用，所以应根据所用组织类型确定使用酶的种类。此外，乙二胺四乙酸（EDTA）能结合组织中的二价钙离子和镁离子，而二价钙离子和镁离子有维持细胞表面完整性和维持细胞间质结构的作用，因此，几种酶和EDTA联合使用有助于充分消化实体组织，提高细胞产出效率。下面仅介绍组织消化的一般过程，对于每种组织消化时所用的具体步骤需参考该组织细胞培养时的消化方法。
    1）将组织剪成l～2mm3左右的小块。
    2）用胰蛋白酶或胶原酶消化组织块，胰蛋白酶适用于消化细胞间质较少的软组织，如胚胎、上皮、肝、肾等组织。胰蛋白酶工作浓度一般为0．1％～0．5％。对于纤维较多的组织或较硬的癌组织常用0．25％胶原酶，胶原酶对组织中胶原蛋白类结构消化作用强，它仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。胶原酶常用剂量为0．1～0．3ug／m1。用大于组织量30～50倍的胰蛋白酶液或胶原酶液在37℃条件下消化组织，需每隔一定时间摇动一次。消化时间的长短依组织类型而定，一般来说，胰蛋白酶需作用20～60分钟，胶原酶需4～48小时。在消化过程中，如发现组织块已分散而失去块的形状，经摇动即可成为絮状悬液，则可取出少量液体在显微镜下观察，可见分散的单个细胞和少量的细胞团，可认为组织已消化充分。
    3）消化完毕后，将细胞悬液通过100目孔径尼龙网或不锈钢网滤过，以除掉未充分消化的组织。
    4）已过滤的原代细胞悬液经800～1000rpm低速离心5～10分钟后，弃上清液，加PBS液，轻轻吹打形成细胞悬液，细胞计数后即可使用。
 500mg    Sodium Nitroprusside     13755-38-9     硝普钠标准品
500mg    Sennosides     517-43-1     番泻苷标准品
500mg    Riboflavin (Vitamin B2)    83-88-5     维生素B2标准品
500mg    Quercetin     6151-25-3     槲皮素标准品
500mg    Pyrvinium Pamoate     3546-41-6     双羟萘酸扑蛲宁标准品
500mg    Pyruvic Acid     127-17-3     丙酮酸标准品
500mg    Pyran Pamoate     22204-24-6     双羟萘酸噻嘧啶标准品
500mg    Purified Guggul Extract        纯化香胶树提取物标准品
500mg    Propylene Glycol Dilaurate    22788-19-8     丙二醇二月桂酸酯标准品
500mg    Promethazine Hydrochloride     58-33-3     盐酸异丙嗪标准品
500mg    Prednisolone Sodium Phosphate     125-02-0     泼尼松龙磷酸钠标准品
500mg    Prazosin Hydrochloride    19237-84-4     盐酸哌唑嗪标准品
原代细胞