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原代细胞培养液的主要成份是什么?

时间:2018-4-16阅读:92
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实验室常用的原代细胞培养液的主要成分是氨基酸、葡萄糖、无机盐、维生素和微量元素等。为了维持稳定的pH,培养液中一般有一个pH缓冲系统,同时常加入少量的酚红作为pH指示剂。另外培养液中一般需要加入一定量的血清。
    在细胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS (等渗), 轻轻颠倒混匀,将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟,弃上清留细胞沉淀。
重复上述操作反复洗涤1~2次。
3、匀浆的方式:手工匀浆,超声破碎,裂解液裂解,反复冻融。
① 手工匀浆:在细胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变,一般加入0.5ml,细胞密度不小于一百万个/ml),混匀,将细胞悬浮于PBS中,用移液器将细胞悬浮液移至玻璃匀浆管中(2ml玻璃匀浆管),将玻璃匀浆管置于冰水混合物中,手动匀浆3分钟,然后取破碎好的细胞悬浮液进行测定。
② 超声破碎:
在细胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变,一般加入0.5ml,细胞密度不小于一百万个/ml),混匀,将细胞悬浮于PBS中,在冰水浴条件下进行如下操作:
     a、用超声粉碎机进行粉碎,可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎,也可用国产超声波发生仪,用400安培,5秒/次,间隙10秒反复3~5次。
      b、用超声细胞破碎仪,300W功率,每次超声3~5秒,间隔30秒,重复4~5次。
    一般培养液都含酚红作为pH指示剂,它是细胞培养液状态的一个很好的标志。过长时间的培养或者微生物的污染都会使培养液的pH发生改变。需要注意的是,酚红可以模拟类固醇激素(尤其是雌性激素)的作用,所以如果培养的原代细胞对雌性激素敏感(比如实验本身就是研究雌性激素对细胞的作用),就应当使用没有酚红的培养液。
100275-200702    含量测定    100mg    盐酸丙卡特罗
100276-199801    检查用    50mg    氨鲁米特
100277-200702    含量测定    200mg    大豆油   
100278-200402    含量测定    50mg    对羟基苯甲酸甲酯
100279-200502    含量测定    100mg    泛酸钠
100280-201002    含量测定    100mg    格列喹酮
100281-200602    含量测定    100mg    格列吡嗪
100283-        100mg    核黄素磷酸钠
100284-200602     含量测定    100mg    吉非罗齐
100287-200701    含量测定    100mg    麦芽糖
100288-200201    含量测定    50mg    尿素
原代细胞

 

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