豚鼠丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）elisa定量检测试剂盒 操作步骤

豚鼠丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)elisa定量检测试剂盒
操作步骤：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。　

（2）酶标板置4℃，包被过夜。

（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

（4）阴性对照孔每孔加入pbs 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1：500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。　

（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。　

（6）洗板，同（4）。　

（7）每孔加1：5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。　

（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。　

（9）洗板，同（4）。　

（10）每孔加tmb显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。　

（11）每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。　

（12）分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，终测得的od值为两者之差（w1-w2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。