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我们在进行细胞培养实验过程中易受到较多因素影响,导致支原体污染,对此就要对其进行支原体检测,排除被污染的可能,就需要借助相关的检测技术进行支原体检测,那么支原体检测方法有哪些?常用的是直接培养法、DNA荧光染色法,酶联免疫吸附试验,PCR检测法等方法进行检测。
直接培养法是检测支原体的标准方法。是把样品接种到支原体培养基上进行培养,并通过观察液体培养基的颜色变化或是固体培养基上是否生长支原体菌落进行判断,但培养法所需培养时间较长,要3~4周左右的时间,其次用培养法不能在同一培养基中检测出所有的支原体类型,该方法常用于对种毒或疫苗成品的支原体检测。
DNA荧光染色法,是把要检测的样品接种在指示细胞中进行培养,然后用特异性荧光染料进行染色,再用荧光显微镜进行观察,通过附着在细胞表面的支原体DNA的着色情况判断该样品是否被支原体污染。该方法用时短,可进行多个样品检测,还能检测出使用直接培养法难以检测出的支原体类型。根据研究发现DNA荧光染色法比直接培养法更为敏感、方便,耗时短、准确稳定。
酶联免疫吸附试验即ELISA检测法,对诊断支原体是较方便和准确的方法之一,常见的ELISA检测法有间接法和抗原竞争法等,检测支原体都有较好的特异性及敏感性,并且可以一次性进行多样品检测,并且成为检测支原体的常规方法之一,一般是通过比色法得出相应的结果进一步来判定是否有支原体污染的情况。
PCR方法是一种DNA复制的体外扩增方法,由于支原体生长缓慢对营养环境要求较高,对支原体直接培养法检测还有一定局限性,而PCR检测法相对于直接培养法更为快速、敏感。其中的巢式PCR检测法是在普通PCR检测方法上进行优化改进的,通过巢式PCR引物扩增后存在的目的片段情况进行合理判断,并可以对支原体类型进行准确的分析及判断,进一步对污染源进行判断。
以上就是关于支原体检测方法有哪些的问题解答,如果你想补充更多检测方法,请联系百奥创新客服!
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