ELISA定量检查试剂盒操作与显色

                ELISA定量检查试剂盒操作与显色

ELISA定量检查试剂盒操作过程
试验开端前，各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解)；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量防止起泡。试验前应猜测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品契合试剂盒的检查规模，核算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样：别离设空白孔、规范孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔别离加规范品或待测样品100μl，留意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，悄悄晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反响120分钟。为确保试验成果有效性，每次试验请运用新的规范品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不必洗刷。每孔加检查溶液A工作液 100μl(在运用前一小时内制造)，酶标板加上覆膜, 37℃反响60分钟。
3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大概400μl/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4. 每孔加检查溶液B工作液(同检查A工作液) 100μl，酶标板加上覆膜37℃反响60分钟。
5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内，此刻肉眼可见规范品的前3-4孔有显着的梯度兰色，后3-4孔梯度不显着，即可停止)。
7. 依序每孔加停止溶液50μl，停止反响，此刻蓝色立转黄色。停止液的参加次序应尽量与底物液的参加次序一样。为了确保试验成果的性，底物反响时刻到后应尽快参加停止液。

ELISA定量检查试剂盒的显色可在室温进行，时刻通常不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的缩短或延伸反响时刻，及时判别。恰当提高温度有助于加快显色进行。在定量测定中，参加底物后的反响温度和时刻应按规定力求。
显色通常在室外温或37℃反响20-30分钟后即不再加深，再延伸反响时刻，可使本底值增高。显色反响应避光进行，显色反响结束时参加停止液停止反响。