试剂和培养基

                                                  试剂和培养基 

                  Sterile water bottles 200 ml, 500 ml, or 950 ml water.Autoclave.0.05 M CaCl2 （per 200 ml） CaCl2·2 H2O 1.5 gAdd 198 ml water.
Autoclave.0.5 M CaCl2 （per 200 ml） CaCl2·2 H2O 15.0 gAdd 188 ml water.Autoclave.0.1 M MgSO4 （per 200 ml） MgSO4 （anhydrous） 2.4 gAdd 200 ml water.Autoclave.10% MSG （for 200 ml） Glutamic acid （Na） 20.0 gAdd 188 ml water.Autoclave.40% Glucose （per 200 ml） Glucose（dextrose） 80.0 gAdd water to 200 ml（~145-150 ml）.Autoclave.10% CAA （per 200 ml） Casein Acid Hydrolysate 20.0 gAdd 186 ml water.Autoclave.10% Yeast （per 200 ml） Yeast extract 20.0 gAdd 150-160 ml water. Autoclave.Add 150 ul ß-mercaptoethanolafter autoclaving.20X Tryptone/NaCl （per 200 ml） Tryptone 40.0 gNaCl 20.0 gAdd 190 ml water. Autoclave.Add 150 ul ß-mercaptoethanolafter autoclaving.

               10X M9 stock （for 200 ml） Na2HPO4 （anhydr.） 12.0 gKH2PO4 6.0 gNaCl 1.0 gNH4Cl 2.0 gAdd 196 ml H2O. Autoclave.Note: leave out NH4Cl to prepare 10X M9-N.10X M9 - N stock （for 200 ml） Na2HPO4 （anhydr.） 12.0 gKH2PO4 6.0 gNaCl 1.0 gAdd 196 ml H2O. Autoclave.Note: leave out NH4Cl!100X P （for 200 ml） KH2PO4 18.1 gK2HPO4 5.0 gpH to 6.3 with 10 N KOH!Add 192 ml H20. Autoclave.1X SM （for 200 ml） NaCl 1.16 gMgSO4 0.20 gGelatin （2%） 1.00 ml or 20 mgAdd 190 ml H2O, then add:Tris （1 M, pH 7.5） 10.0 mlAutoclave.2% Gelatin （per 500 ml） Gelatin 10 gAdd 500 ml water.Autoclave.20% Succinate （for 500 ml） Succinic acid 100 gKOH 90 gAdd to 400 ml ice cold water.Measure pH to 6.4, filter sterilize.10X TBE （electrophoresis buffer） Tris base 108.0 gNa2EDTA 9.3 gBoric Acid 55.0 gBring volume to 1 L with water.Use double distilled water.pH should be 8.3; if not adjust dropwise with conc. NaOH.Water agar stock （for 190 ml） Agar 3.0 gAdd 190 ml H2O.Autoclave, store in 60C water bath.

               R agar stock 200 ml 500 mlTryptone........ 2.0 g 5.0 gNaCl............ 1.0 g 2.5 gAgar............ 3.0 g 7.5 gAdd H2O......... 194.0 ml 485.0 mlAutoclave, store in 60C water bath.LB agar 200 ml 1000 ml Tryptone ...... 2 g 10 gNaCl .......... 1 g 5 gYeast extract . 1 g 5 gAgar .......... 3 g 15 gAdd H2O ...... 193 ml 990 mlAutoclave, store in 60C water bath. LB agar can also be made byadding 10 ml 10% yeast extract and 10 ml 20X Tryptone/NaCl to190 ml WA.NZ 200 ml 500 ml NZ amine .... 2.0 g 5.0 gNaCl ........ 1.0 g 2.5 gMgSO4 （anhydrous）.. 0.2 g 0.5 gAdd 10 M NaOH （1 drop/100 ml） after adding water.Autoclave.For agar media:Agar ........ 2.4 g 6.0 gStir before and after autoclaving.GYPC to WA stock: 200 ml 1000 ml Glucose （40%） ..... 2.0 ml 10.0 mlYeast extract （10%） 4.0 ml 20.0 ml100X P ............ 2.0 ml 10.0 mlCAA （10%） ......... 4.0 ml 20.0 mlSuccinate （20%）.... 1.0 ml 5.0 mlAdd appropriate antibiotics.Pour plates.ORS minimal 200 ml 1000 ml 10X M9 ......... 10 ml 50 mlSuccinate （20%）. 2 ml 10 mlMSG （10%） ...... 2 ml 10 mlGlucose （40%） .. 1 ml 5 mlMgSO4 （0.1 M） .. 1 ml 5 mlCaCl2 （0.5 M） .. 200 ul 1 ml1000X vitamins .

                      200 ul 1 mlWater .......... 184 ml 920 mlOmit succinate and add 10 ml glucose for storage medium.E. coli minimal 200 ml 1000 ml 10X M9 .......... 20 ml 100 mlMgSO4 （0.1 M） ... 2 ml 10 mlCaCl2 （0.5 M） ... 0.2 ml 1 ml1000X vitamins .. 0.2 ml 1 mlGlucose （40%） ... 2 ml 10 mlXC minimal 200 ml 1000 ml 10X M9 .......... 5.0 ml 25 mlMgSO4 （0.1 M） ... 1.0 ml 5 mlCaCl2 （0.5 M） ... 0.2 ml 1 ml200X 7 aa stock.. 0.2 ml 1 mlGlucose （40%） ... 0.5 ml 2.5 mlGlycerol （50%） .. 4.0 ml 20 mlNif plates 10X Nif buffer 100 ml10X trace elements 100 ml1000X vitamins 1 mlSterile dd H2O 799 mlAgarose 6 gSuccinate （20%） 20 ml（Succinate is already 0.4% from that in 10X nif buffer）10X Nif buffer 1000 ml K2HPO4 34.02 gKH2PO4 57.06 gSuccinate （20%） 200.00 mlpH should be 6.4 after 10X dilution.1000X ORS vitamins Nicotinic acid 2.0 mg/mlPantothenate 1.0 mg/mlBiotin 0.2 mg/mlStir