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当前位置：上海抚生实业有限公司>>细胞生物学试剂>>细胞凋亡与增殖>> Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
| 货号 | FS-X9593 |
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产品介绍:
AlamaBlue 细胞活力检测试剂盒提供了一种可靠、灵敏、安全和低成本的快速有效检测细胞活力与毒性的方法。AlamaBlue 通过在细胞生长的培养基中所产生的化学还原反应，将非荧光信号的染料转换成为一红色荧光物质，试卤灵（9-羟基-3-异吩恶嗪酮7-羟基-3H-吩恶嗪-3-酮），从而检测细胞的存活率。维持细胞需要还原性环境而抑制生长则表现为氧化型环境。细胞生长率相关的降低可表现为氧化还原指示剂从氧化型（非荧光素、紫色）转为还原型（荧光素、红色）。该荧光信号可以用530~560nm 的激发波激发，在590nm 处可以获发射波，检测570 和600nm 的的吸光度值，校正监测值，可以减去相应的570nm 和600nm 的背景吸光度值。检测所产生的荧光信号是与样品中的活细胞数成正比的。 AlamaBlue 细胞活性检测试剂盒的灵敏度相似于[3H]胸苷法检测细胞增殖法。根据不同类型的细胞，AlamaBlue 可以检测到至少40个细胞，同时保证很好的重现性和灵敏度。作为试卤灵（紫红、红色荧光）可以进一步被还原为水解化的试卤灵（无色、无荧光），当细胞数量增多，所有的刃天青（7-羟基-3-羰基-10-氧化-三氢吩恶嗪）被转换为试卤灵（9-羟基-3-异吩恶嗪酮7-羟基-3H-吩恶嗪-3-酮），试剂盒的信号反而会发生衰减。因此，对于您所用的试剂盒来说，针对不同的细胞类型，应该调整您的细胞数，做相应的优化，才能得到更好的结果。 操作说明 以下操作可用作通用指导建议。考虑不同细胞类型与培养条件的差异性，有必要根据实际情况优化您的操作步骤。 1. 96 孔细胞培养板每孔100μL 培养基饲养细胞，控制细胞数目在40~10000 个/贴壁细胞，2000~500000 个/悬浮细胞。设置空培养基做对照。 2. 加入10μL AlamaBlue 溶液至培养基中，37 度孵育：24 小时（比色法读数）；5-6 小时（荧光读数）。 3. 检测570nm 和600nm 的吸光度，或者用荧光微孔板读数530nm 激发，590nm 发射波读数。 4. 如果采用比色法检测，选择OD570-OD600 检测，如果检测荧光信号，请在校正OD 值后，先设置标准曲线，选择合适您实验的细胞佳浓度。 |
中文名称：Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
英文名称：AlamaBlue Cell Viability Assay Kit
产品规格：500T
货号：FS-X9593
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
乙酰转移mei(ChAT)检测试剂盒 forCholineAcetyltransferase(ChAT)
颗粒体蛋白(GRN)检测试剂盒 forGranulin(GRN)
肌球蛋白ⅩⅨ(MYO19)检测试剂盒 forMyosinXIX(MYO19)
透明质suan结合蛋白1(HABP1)检测试剂盒 forHyaluronanBindingProtein1(HABP1)
血栓调节蛋白(TM)检测试剂盒 forThrombomodulin(TM)
半胱氨suan蛋白mei抑制剂1(CST1)检测试剂盒 forCystatin1(CST1)
黏病毒耐药蛋白2(MX2)检测试剂盒 forMyxovirusResistance2(MX2)
白介su1δ(FIL1δ)检测试剂盒 forInterleukin1Delta(FIL1d)
IgE-Fc片段受体Ⅱ(FcεRⅡ)检测试剂盒 forReceptorIIForTheFcRegionOfImmunoglobulinE(FceRII)
G抗原10(GAGE10)检测试剂盒 forGAntigen10(GAGE10)
Neurobeachin蛋白(NBEA)检测试剂盒 forNeurobeachin(NBEA)
S100钙结合蛋白B(S100B)检测试剂盒 forS100CalciumBindingProteinB(S100B)
胰蛋白mei原激活肽(TAP)检测试剂盒 forTrypsinogenActivationPeptide(TAP)
S100钙结合蛋白A7(S100A7)检测试剂盒 forS100CalciumBindingProteinA7(S100A7)
信号淋巴细胞激活分子家族成员7(SLAMF7)检测试剂盒 forSignalingLymphocyticActivationMoleculeFamily,Member7(SLAMF7)
互生蛋白α1(SNTα1)检测试剂盒 forSyntrophinAlpha1(SNTa1)
骨桥su(OPN)检测试剂盒 forOsteopontin(OPN)
Alarma Blue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒酒石suan钠标准品 规格:500mg×4vials 英文名称：Sodium Tartrate Dihydrate
左美丙嗪标准品 规格:200mg 英文名称：Methotrimeprazine
雷特标准品 规格:200mg 英文名称：Ceforanide
半乳糖chun标准品 规格:500mg 英文名称：Galactitol
比林标准品 规格:200mg 英文名称：Antipyrine
jia氧苄啶相关物质A标准品 规格:25mg 英文名称：
力农标准品 规格:500mg 英文名称：Amrinone
胆影suan标准品 规格:200mg 英文名称：Iodipamide
jia硫咪zuo标准品 规格:200mg 英文名称：Methimazole
奥沙标准品 规格:200mg 英文名称：Oxazepam CIV
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