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| 货号 | FS-X9734 |
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培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：Caspase-8活性测定试剂盒
英文名称：Caspase-8 Activity colorimetric assay Kit
产品规格：20T|50T|100T
货号：FS-X9734
产品介绍:
本试剂盒适用于检测哺乳动物组织、细胞Caspase-8活性。Caspase-8也称FLICE、MACH 或Mch5，通常以酶原的形式存在，凋亡时被激活，被认为是细胞凋亡转导过程的上游caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介导的凋亡过程中Caspase-8被激活形成二聚体，进而激活下游Caspase-4,6,9,10。测定原理基于Caspase-8特异水解多肽底物IETD-pNA(Ile-Glu-Thr-Asp-p-nitroanilide)，释放的游离硝基pNA在405nm有大吸光度。采用可见光光度比色法测定pNA而得到Caspase活性。 储存条件：按标签标示分别保存试剂，有效期1年 |
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
opiorphin(opiorphin)英文名：opiorphin BTBD6蛋白抗体包装5g
N-乙酰基-丝酰-天门冬酰-赖酰-脯(AcSDKP)英文名：AcSDKP BMP内皮调节蛋白抗体包装25g
N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷(NAG)英文名：NAG 肝病NS5A反转录蛋白8抗体包装5g
N端前脑钠(NT-proBNP)英文名：NT-proBNP 骨形态发生蛋白1/胶原C蛋白肽链内切抗体包装1g
NANOG同源域蛋白(NANOG)英文名：NANOG 骨形态发生蛋白9抗体包装5g
NAD依赖性蛋白脱乙酰sirtuin-1(SIRT1)英文名：SIRT1 微管蛋白β辅助因子D抗体包装25g
NADPH氧化1(NOX1)英文名：NOX1 钙粘蛋白相关蛋白受体BTR1抗体包装5g
M型肌激(CKM)英文名：CKM 有丝分裂蛋白BUB3抗体包装1g
MAP激活化蛋白激2(MAPKAPK2)英文名：MAPKAPK2 p60TRP蛋白抗体包装5g
L选择(L-Selectin/CD62L)英文名：L-Selectin/CD62L 博莱霉解抗体包装1g
L-乳脱氢A链(LDH-A)英文名：LDH-A 短蛋白聚糖抗体包装5g
L解(PAL)英文名：PAL BTB/POZ结构域蛋白3抗体包装10MG
Klotho(Klotho)英文名：Klotho 巴尔得-别德尔综合征相关蛋白12抗体包装100g
KI-67抗原(MKI67)英文名：MKI67 碱性亮拉链蛋白BZW1抗体包装25g
I型胶原蛋白(COL-1)英文名：COL-1 骨形态发生蛋白受体1B抗体包装5g
ASH1蛋白抗体肝核因子1β(HNF1β)CWHM-12是αV整联蛋白的有效抑制剂，抑制αvβ8，αvβ3，αvβ6和αvβ1的 IC50 值分别为0.2，0.8，1.5，1.8 nM。
Caspase-8活性测定试剂盒青霉 2-乙可溶性血管生成受体激2
金针菇（毛柄、冬菇） 5-氨基邻甲酚硫酸盐可溶性血栓调节蛋白
大肠埃希 4-氨基-3-吡啶可溶性血纤蛋白单体复合物
牛瘟病 二(2-甲基-2-烯酸)2-羟基-1,3-酯可溶性肿瘤坏死因子受体1
芽孢杆 5-氟-2-甲氧基苯可溶性肿瘤坏死因子受体1
异常汉逊酵母 4-溴-2,6-二氟可溶性肿瘤坏死因子受体2
苏云金芽孢杆锡卢亚种 N-(叔丁氧基羰基)-对甲苯磺酰可溶性肿瘤坏死因子受体2
甲基杆属 N-甲基-2-氟苯可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体
根瘤 氢氧化铅可溶性肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂
寄生曲霉 (R)-(+)-二氨基烷可溶性转铁蛋白受体
伪假苍黄 异辛酸钠可替丁
多主葡萄壳 4-苄克拉拉蛋白
无二酸柠檬酸杆 4-基-1-羧酸乙酯空肠弯曲黏附蛋白
木贼镰孢 2-氟-5-空泡相关蛋白A
香菇 2-氟-4-羟基苯盐酸盐狂犬病抗原
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
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