当前位置:上海抚生实业有限公司>>细胞生物学试剂>>细胞凋亡与增殖>> 吖啶橙染色试剂盒
货号 | FS-X9694 |
---|
中文名称:吖啶橙染色试剂盒
英文名称:
产品规格:100T
货号:FS-X9694
产品介绍:
橙(Acridine Orange,AO)为一种荧光染料,该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm,吸收波长为515nm。它与细胞中DNA和RNA 结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光,红色荧光为AO-DNA(F>600nm),绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。因此,在荧光显微镜下观察,橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。橙AO 常与溴化乙啶EB 合用双染,因EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。 储存条件:-20℃避光保存。 有效期:一年。 |
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
前列腺性磷(PAP)英文名:PAP 通道蛋白4抗体包装5g
前列腺G/H合1(PTGS1)英文名:PTGS1 活化复制因子2抗体包装5MG
前列腺F(PGF)英文名:PGF 腺苷单磷活化蛋白激β1抗体包装5MG
前列腺E2合成(PGES)英文名:PGES 糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽抗体包装1g
前列腺E2(PGE-2)英文名:PGE-2 血管紧张Ⅱ抗体包装5g
前列腺E2(PGE2)英文名:PGE2 血管紧张Ⅱ受体1抗体包装1g
前列腺E1(PGE1)英文名:PGE1 血管生成-1抗体包装5g
前列腺D2(PGD2)英文名:PGD2 膜粘连蛋白5抗体包装1g
前列环(PGI2)英文名:PGI2 重组膜粘连蛋白5抗体包装5g
前白蛋白(PA)英文名:PA 衔接蛋白α-Adaptin抗体包装1g
葡萄糖依赖性胰岛释放多肽(GIP)英文名:GIP 凋亡蛋白活性因子-1抗体(C端)包装250mg
葡萄糖调节蛋白78(GRP78)英文名:GRP78 凋亡蛋白活性因子-1抗体(N端)包装5g
葡萄糖激(GCK)英文名:GCK 三磷腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体包装100g
葡萄糖6磷脱氢(G6PD)英文名:G6PD 载脂蛋白E抗体包装500g
破骨细胞分化因子(ODF)英文名:ODF 淀粉样肽前体蛋白抗体包装100g
腺苷单磷活化蛋白激α2抗体免疫球蛋白M(IgM)Nintedanib esylate (BIBF 1120 esylate) 是一种有效的 VEGFR1/2/3,FGFR1/2/3 和&n
吖啶橙染色试剂盒冬菇 α-松油烯白介29
木糖葡糖酸醋杆* 橙皮白介3
食红球 (+)-3-蒈烯白介31
嗜线虫致病杆 柴胡总皂苷白介32
果生链核盘 3-甲氧基吡咯烷盐酸盐白介32R
裂褶 N-甲基-L-苯氨酸白介32γ
棒弯孢 15-150kDa双色预染蛋白Marker白介33
Phoma medicaginis var. medicaginis 2-萘甲酰白介35
南节杆 N-甲基-L-苯氨酸白介36
Janibacter melonis 2,4,6-三硝基酚白介37
苏云金芽孢杆 阿尔白介38
海摩替亚氏 卡林钙白介4
地下新鞘氨 氧阿达唑白介5
Wautersiella 云烟浸膏白介6
普雷恩毛霉 云烟净油白介6受体
请输入账号
请输入密码
请输验证码
以上信息由企业自行提供,信息内容的真实性、准确性和合法性由相关企业负责,仪表网对此不承担任何保证责任。
温馨提示:为规避购买风险,建议您在购买产品前务必确认供应商资质及产品质量。