小肠结肠炎耶尔森氏菌（PCR-荧光探针法） 返回列表页

参数规格：
产品名称：小肠结肠炎耶尔森氏菌（PCR-荧光探针法）
产品规格：48T   0.1PCR管
产品货号：FS-P10769
产品分类：荧光探针法
产品运输：低温运输
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性*定量方法，已得到的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
 AS3.2918培养基: 311模式菌株: no种属: Penicillium│oxalicum提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 28℃ 真空冷冻干燥法

植物乳杆菌培养基: 33模式菌株: no污泥提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 37℃ -80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法

 -1595℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

聚多曲霉生长条件: 25-28℃培养基: 0014提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no

 HBUM83884模式菌株: no安全等级: 1种属: Streptomyces│sp.土壤提供形式: 冻干物培养基: 0012生长条件: 28℃

鼠种布鲁氏菌培养基: 401作为生物学分型鉴定参考菌株提供形式: 冻干物安全等级: 3模式菌株: yes生长条件: 37 真空冷冻干燥法;

黑曲霉培养基: CM0013产柠檬。提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 35℃ 矿物油法

 CICC6068培养基: 61,厌氧研究，。种属: Bifidobacteriumlongum安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 37℃

曲霉属培养基: CM0014抗癌活性提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28C 真空冷冻干燥

 -1596℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

运动节杆菌培养基: 820模式菌株: no土壤提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 30℃ 真空冷冻干燥法；定期移植法

桔橙游动放线菌培养基: 0011模式菌株提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: yes生长条件: 28℃ 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

短小芽孢杆菌培养基: 0081模式菌株: no土壤提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 33℃ -80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；矿物油法

绛红产色小单孢菌(紫红产色小单孢菌,褐色小单孢菌)培养基: 0027代谢产物无抗菌或杀虫活性。提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28℃ 液氮超低温冻结法；矿物油法；定期移植法

暗孢节菱孢生长条件: 25培养基: 14枝杆提供形式: 斜面培养物模式菌株: no 定期移植法

酿酒酵母培养基: CM0077以淀粉为原料发酵制酒精。提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28-30℃ 真空冷冻干燥法

盐平阳霉素p70 S6 Kinase/P70 Beta1  p70S6Kb抗原Thrombospondin 2  血小板反应蛋白2/凝血酶敏感蛋白2抗体

硫博莱霉素/博来霉素/争光霉素PALB2(partner and locaizer of BRCA2)  乳腺癌易感基因相关蛋白2Thrombomodulin/CD141  血栓调节蛋白抗体

替佐米/保特佐米PAFR/PTAFR  血小板活化因子受体抗原thrombin II  凝血酶Ⅱ(凝血因子II)抗体

替佐米(标准品)Phospho-PAK4 (Ser99) peptide  磷化p21激活激酶4多肽抗原Thrap3/TRAP150  甲状腺激素受体相关蛋白3抗体

博舒替尼PAK7/PAK5/MBT  激活激酶PAK7/PAK5抗原THRA1+2  甲状腺激素受体α1+α2抗体

布地奈德PAR-1 (Protease-activated receptors-1)  蛋白酶激活受体-1抗原THRA1  甲状腺激素受体α1抗体

布地奈德（标准品）PAR-2 (Protease-activated receptors-2)  蛋白酶激活受体-2抗原THOC2  转录因子THOC2抗体

亚叶钙PAR4 (protease-activated receptor 4)  蛋白酶活化受体4/前列腺凋亡反应蛋白4抗原Thioster-containing protein 1  按蚊硫酯包含蛋白-1抗体

亚叶钙（标准品）PARP(poly ADP-ribose polymerase)N-Terminus  多腺苷二磷多聚酶抗原(N端)Thioredoxin 2  线粒体硫氧还蛋白2抗体

喜树碱PAX8(Paired box gene 8)  配对盒基因8抗原Thioredoxin  硫氧还蛋白抗体
小肠结肠炎耶尔森氏菌（PCR-荧光探针法）FluorometholoneAcetate　氟米龙醋酯　质量规格：>98%,BR

Pentabromophenylether　十二醚　质量规格：>98%,BR

3-Amino-3-azabicyclo[3.3.0]octanehydrochloride　氨基杂环盐盐　质量规格：>98%,BR

Kasugamycin　春雷霉素;春日霉素;克死霉　质量规格：>98%,BR

TulathromycinA　土拉霉素A，托拉菌素A,泰拉霉素　质量规格：>98%,BR

TulathromycinA　土拉霉素A(标准品)　质量规格：>98%,BR

Latamoxefsodium　拉氧头孢钠　质量规格：>98%,BR

Procyanidin　原花青素　质量规格：>98%,BR

Procyanidin　原花青素（标准品）　质量规格：>98%,BR

Piperine　胡椒　质量规格：>98%,BR

Piperine　胡椒(标准品)　质量规格：>98%,BR

PneumocandinB0　纽莫康定B0(肺囊康定)　质量规格：>98%,BR

Formoterol 　福莫特罗　质量规格：>98%,BR

HomatropineMethylBromide　甲后马托品　质量规格：>98%,BR

AbirateroneAcetate　乙阿比特龙酯　质量规格：>98%,BR
PCR的反应条件：
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。
如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。