流感病毒N2亚型核酸检测试剂盒 返回列表页

实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性*定量方法，已得到的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
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参数规格：
产品名称：流感病毒N2亚型核酸检测试剂盒
产品规格：50T
产品货号：FS-P9637
产品分类：荧光PCR法
产品运输：低温运输
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
PCR的反应条件：
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。
如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。
人Burkkit淋巴瘤；Daudi形态特性: 淋巴母样生长特性: 悬浮生长Bovine IGF2 ELISA Kit

小鼠树突状肉瘤；DCS形态特性: 梭形,胞突呈分枝状，常有大小粗细不等的胞突生长特性: 贴壁生长Mouse IL-1Ra ELISA KIT

Asp2人胚胎肾转化；FC33形态特性: 上皮样；多角生长特性: 贴壁生长Human Activin A ELISA KIT

人胚胎眼巩膜成纤维；HFSF形态特性: 成纤维样生长特性: 贴壁生长Human LDLR ELISA KIT

小鼠淋巴瘤；EL4形态特性: 淋巴母样生长特性: 悬浮生长Human CXCL1 ELISA KIT

人胚胎眼Tenon's囊成纤维；HFTF形态特性: 成纤维样生长特性: 贴壁生长Human Tetranectin ELISA KIT

人胚肾（亚系克隆）；FIP293形态特性: 上皮样；多角生长特性: 贴壁生长Mouse CXCL10 ELISA KIT

人十二脂肠腺癌；HuTu-80形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Mouse IL-17A ELISA KIT

大鼠肝；IAR20形态特性: 圆形、多角生长特性: 贴壁生长Mouse IL-5 ELISA KIT

新生牛眼晶体上皮；NBLE形态特性: 多角生长特性: 贴壁生长Bovine H-FABP ELISA Kit

小鼠前胃癌；MFC形态特性: 上皮样生长特性: 贴壁生长Bovine H-FABP ELISA Kit

新生牛眼Tenon's囊成纤维；NBTF形态特性: 成纤维样生长特性: 贴壁生长Mouse IgG(Total) ELISA KIT

小鼠单核巨噬白血病；RAW264.7[RAW264.7]形态特性: 不规则圆形生长特性: 贴壁生长Mouse P-selectin ELISA KIT

兔角膜后基质层成纤维；RCBBF形态特性: 成纤维样生长特性: 贴壁生长Human SAA4 ELISA KIT

兔眼Tenon's囊成纤维；RYTF形态特性: 成纤维样生长特性: 贴壁生长Human CXCL4 ELISA KIT

稳定表达EBNA1的人胚肾；293E形态特性: 上皮样；多角生长特性: 贴壁生长Chicken IL-4 ELISA Kit
流感病毒N2亚型核酸检测试剂盒小鼠骨钙素/骨谷氨蛋白(OT/BGP)ELISA试剂盒ABAbELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠血管舒缓激肽(BK)ELISA试剂盒ABAELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠铜蓝蛋白(CP/CER)ELISA试剂盒ABCA1ELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒ABM-AbELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠脂联素(ADP)ELISA试剂盒ABPELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠雌激素(E)ELISA试剂盒AC-1ELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA试剂盒ACA/CENPELISAKit产品规格:48T/96T。

小鼠环磷腺苷(cAMP)ELISA试剂盒ACACELISAKit产品规格:48T/96T。