当前位置:上海莼试生物技术有限公司>>细胞培养>>细胞,组织提取物>> T25m2大鼠肾动脉组织提取物说明
大鼠肾动脉组织提取物【Kidney: Normal Rat Renal Artery Derivatives】 肾脏为成对的扁豆状器官,位于腹膜后脊柱两旁浅窝中。肾动脉左右各一,由腹主动脉垂直分出,在肠系膜上动脉下方1-2cm,第1、2腰椎之间发出,分别经肾门入左、右肾。公司科技提供来自新鲜或冷冻大鼠肾动脉组织中高质量的总RNA,PCR准备的第一条cDNA链,蛋白质及其亚组分。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。
潜在的应用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA选择性剪接;<3>基因克隆与目标测序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白检测与蛋白质组学;<6>芯片研究与表达图谱。该细胞只可用于科研,不得用于临床应用。
产品名称 | 大鼠肾动脉组织提取物说明 |
规格 | T25m2 |
货号 | CS-964351 |
收到冻存细胞的处理方法:
1.37°C水浴预热培养基;
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(解冻后不要继续暖细胞);
3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞,1000rpm离心5min;
4.弃上清,加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中,轻轻晃匀;
5.置于37°C,5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧);
6.第二天,用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
1109-28-0 Maltotriose 10mM*1mLinWater Enterobacter spp.肠杆菌属通用LAMP试剂盒
110-94-1 Glutaric acid 1g Gardnerella vaginalis加德纳菌LAMP试剂盒
11094-59-0 Tridocosahexaenoin 100mg Anisakis spp.异尖线虫属LAMP试剂盒
11094-59-0 Tridocosahexaenoin 250mg Carnobacterium maltaromaticum麦芽香肉杆菌LAMP试剂盒
11094-59-0 Tridocosahexaenoin 25mg Gardnerella vaginalis加德纳菌LAMP试剂盒
小鼠红白血病细胞;MEL 小鼠气管平滑肌细胞*培养基 100mL依曲韦林-13C3Etravirine-13C3质量规格:美国进口
大鼠主动脉平滑肌细胞 Rattus法莫替丁相关化合物A盐酸盐Famotidine Related Compound A 质量规格:美国进口
SDC1 Others Mouse 小鼠 SDC1 / Syndecan-1 / SYND1 / CD138 细胞裂解液 (阳性对照) 2-羟基查耳酮(>98.0%(GC)(T))2-Hydroxychalcone质量规格:>98.0%(GC)(T)
颌下腺上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)2'-羟基查耳酮(>98.0%(HPLC))2'-Hydroxychalcone质量规格:>98.0%(HPLC)
ERBB4 Others Human / 恒河猴 HER4 / ErbB4 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 4-二氨基-4'-硝基茋(>98.0%(HPLC)(T))4-Dimethylamino-4'-nitrostilbene质量规格:>98.0%(HPLC)(T)
大鼠肾动脉组织提取物说明NCI-H1703(肺鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2洛莫司汀质量规格:>98%,BRLomustine
BHK-21(仓鼠肾细胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M022小鼠甲状腺上皮细胞*培养基100mL B细胞瘤细胞;RAMOS洛莫司汀(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Lomustine
CM-H006肺动脉成纤维细胞*培养基100mL苯氧乙酸(标准品)质量规格:分析标准品Phenoxyacetic acid
WARS Others Human WARS / pRS 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 菲(标准品)质量规格:分析标准品,用于环境分析Phenanthrene
原代上皮细胞特制基础培养基Many types of cells包装:500/250/100ml芘(标准品)质量规格:分析标准品Pyrene
注意事项:
1.接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色
,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
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