当前位置:上海莼试生物技术有限公司>>细胞培养>>细胞,组织提取物>> T25m2人体脑膜组织提取物操作
注意事项:
1.接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色
,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
产品名称 | 人体脑膜组织提取物操作 |
规格 | T25m2 |
货号 | CS-964256 |
人体脑膜组织提取物【Brain: Normal Human Brain Meninges Derivatives】颅骨与脑间有三层膜。由外向内为硬脑膜、蛛网膜和软脑膜;三层膜合称脑膜。公司科技提供来自新鲜或冷冻人体脑膜组织中高质量的总RNA,PCR准备的第一条cDNA链,蛋白质及其亚组分。这些临床定义的正常人体组织标本采集自各地方医院,采集工作根据IRB和HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。
潜在的应用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA选择性剪接;<3>基因克隆与目标测序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白检测与蛋白质组学;<6>芯片研究与表达图谱。该细胞只可用于科研,不得用于临床应用。
收到冻存细胞的处理方法:
1.37°C水浴预热培养基;
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(解冻后不要继续暖细胞);
3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞,1000rpm离心5min;
4.弃上清,加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中,轻轻晃匀;
5.置于37°C,5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧);
6.第二天,用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
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牛胚气管细胞;EB (NBL-4)D-苹果酸(>98%,BR)D-Malic acid质量规格:>98%,BR
FGFBP3 Others Human FGFBP3 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) dGTP;三1酸脱氧鸟苷钠盐2'-Deoxyguanosine 5'-triphosphate tri salt 质量规格:>98%,BR
CL-0169NCI-N87(胃癌细胞)5×106cells/瓶×2dCTP;三1酸脱氧胞苷钠盐2'-Deoxycytidine 5'-triphosphate di salt 质量规格:>98%,BR
Caco-2,结直肠腺癌细胞 腺癌阿霉素耐药株,MEF-7/Adr细胞 SiHa(子细胞)dTTP;2‘-脱氧胸苷-5’三1酸钠盐(dTTP)2'-deoxythymidine-5'-triphosphate (dTTP),3 salt, dihydrate质量规格:>98%,BR
癌细胞;MDA-MB-4682‘-脱氧尿苷2'-Deoxyuridine质量规格:>99%,BR
人体脑膜组织提取物操作TNFSF8 Others Human CD30 Ligand / TNFSF8 细胞裂解液 (阳性对照) 己二酸二异癸酯质量规格:Diisodecyl Adipate
小鼠皮质神经元MN-c壬二酸双(2-乙基己基)酯(>75.0%(GC))质量规格:>75.0%(GC)Bis(2-ethylhexyl) Azelate
MSLN Others Human MSLN / Mesothelin 细胞裂解液 (阳性对照) 己二酸二异丙酯(>99.0%(GC))质量规格:>99.0%(GC)Diisopropyl Adipate
大鼠胰腺上皮细胞*培养基 100mL己二酸二丁酯(>99.0%(GC))质量规格:>99.0%(GC)Dibutyl Adipate
BALL-1B细胞急性白血病细胞 BALL-1 B acute lymphoblastic leukemia cells 90%RPMI1640(内含2mM L-glutamine)+10%胎牛血清吉非罗齐1-O-β-葡萄糖苷酸质量规格:美国进口Gemfibrozil 1-O-β-Glucuronide
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