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Tris-Tricine阴极缓冲液(5×)500ml使用说明书实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会*丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
Tris-Tricine阴极缓冲液(5×)500ml使用说明书注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首*行Annexin V-FITC染色,短可在上机前5分钟再加入PI染色。
CCL5 Protein Human 重组人 CCL5 / RANTES 蛋白 (His & mucin 标签)
人肾成纤维细胞*培养基 100mL
FCRL1 Others Mouse 小鼠 FCRL1 / FCRH1 人细胞裂解液 (阳性对照)
P19细胞,小鼠畸胎瘤细胞 MCF7(癌细胞) 人横纹肌肉瘤细胞;A-204
人胚肺成纤维细胞;WI-38 [WI38]
SK-OV-3(人卵巢癌细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 人细胞裂解液 (阳性对照)
CL-0040BT-474(人导管癌细胞)5×106cells/瓶×2
DPP4 Others Cynomolgus 食蟹猴 DPP4 / DPPIV / CD26 人细胞裂解液 (阳性对照)
*/*溶液P/S
Hep 3B2.1-7[Hep 3B;Hep-3B;Hep3B]细胞,人肝癌细胞 人胚肾细胞(亚系克隆),FIP293细胞 胎儿表皮角化细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
大耳山羊皮肤细胞;LDG-3
SERPIND1 Others Human 人 SerpinD1 人细胞裂解液 (阳性对照)
HA Others H10N9 甲型流感 H10N9 (A/duck/HongKong/562/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照)
人肾小球内皮细胞HRGEC
大鼠小肠血管内皮细胞*培养基 100mL
Raji人Burkitt's淋巴瘤细胞 Raji human Burkitt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
FGF12 Protein Canine 重组狗 FGF12 蛋白
AML-193(人急性单核细胞白血病单核细胞) 5×106cells/瓶×2 人神经细胞HN
大鼠*Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人*/*蛋白磷酸酶(STK)免疫试剂盒 Human serine/threonine protein kinase,STK ELISA Kit
FDA水解酶试剂盒 可见分光光度法 50管/24样
RatVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor1,VEGFR-1/Flt1ELISA试剂盒大鼠血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanlymphocytefactorELISA试剂盒人淋巴细胞因子ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanparamyxovirusparotitisIgMELISAKit人腮腺炎病毒IgMELISA试剂盒规格:96T/48T
山羊白介素2受体(IL-2R)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human pancreatic lipase (PL) ELISA Kit 人胰脂肪酶(PL)ELISA试剂盒
HumanGlutamatedehydrogenase;GDHELISAKit 人*脱轻酶(GDH)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
HumanHeatShockFactor1,HSF1ELISA试剂盒人热休克因子1(HSF-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
组织脯氨酰肽酶(prolinase)比色法定量检测试剂盒20次
HumanMatrixmetalloproteinase8/Neutrophilcollagenase,MMP-8ELISAKit人基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Tris-Tricine阴极缓冲液(5×)500ml使用说明书大鼠胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
大鼠胰岛素受体β(ISR-β)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
大鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
大鼠*原激活肽(TAP)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
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