骨组织蛋白提取试剂盒（2D电泳用）100T实验方法 返回列表页

骨组织蛋白提取试剂盒（2D电泳用）100T实验方法使用注意事项
1．微量试剂取用前请离心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿*、戴手套等。
4．本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不*用于检测组织样本。
骨组织蛋白提取试剂盒（2D电泳用）100T实验方法操作方法
1．悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用*消化收集用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混匀；室温、避光、反应5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer悬浮细胞；
4．请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A．荧光显微镜观察
1．滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；
2．对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；
（1）将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；
（2）用PBS洗涤细胞两次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混匀；
（4）将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；
（5）避光、室温反应5 min。
3．将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下观察激发波长546nm，发射波长647 nm，7-AAD荧光信号呈红色。
B．流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测，激发波长Ex=546 nm; 发射波长Em=647 nm。
7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。
骨组织蛋白提取试剂盒（2D电泳用）100T实验方法实验步骤
贴壁细胞需用0.25%的*消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2％的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的*消化时，注意必须*清除EDTA：在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤，清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2＋螯合，影响Annexin V的结合。
（1）用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer；
（2）细胞收集。悬浮细胞收集：离心5分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合），于室温2000rpm离心5～10分钟，收集细胞；
（3）细胞洗涤：用预冷1×PBS（4℃）重悬细胞一次，2000rpm离心5～10分钟，洗涤细胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞；
（5）Annexin V-FITC标记：加入5μL的Annexin V-FITC混匀后，避光，室温孵育15分钟；
（6）PI标记：上机前5分钟再加入5μL的PI染色。
（7）上机前，补加200μL的1×Binding Buffer。
BTC Protein Human 重组人 BTC / Betacellulin 蛋白

大鼠肺大静脉平滑肌细胞*培养基 100mL

LYVE1 Others Mouse 小鼠 LYVE1 / LYVE-1 人细胞裂解液 (阳性对照)

FRhK-4细胞，恒河猴胚肾细胞 EB-3 [EB3](人淋巴样Burkitt淋巴瘤细胞) CM-H026人淋巴内皮细胞*培养基100mL

支气管上皮细胞培养基BEpiCM-prf

MKN45(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2 皮下脂肪细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)
CL-0100HEC-1-B(人子宫内膜腺癌细胞)5×106cells/瓶×2

CSF2RB Others Rat 大鼠 CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 人细胞裂解液 (阳性对照)

人海马趾星形胶质细胞裂解物HA-h L

OVCaR-3细胞，人卵巢癌细胞 菜青虫卵巢细胞,Pr-HNV8细胞 神经胶质细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)

CEM/C1(人急性淋巴细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2

HUtSMC Pellet 人子宫平滑肌细胞团块 > 1 mio.cells 人表皮角质细胞-cDNAHEK-acDNA
VEGFA Others Human 人 VEGF121b / VEGF-A 人细胞裂解液 (阳性对照)

人心脏微血管内皮细胞RNAHCMEC miRNA5 μg

大额牛皮肤成纤维样细胞;BOS-1

PA319细胞，人大肠癌细胞 人视网膜色素上皮细胞,D407细胞 人前列腺癌细胞;PC-3 [PC3]

Hep G2(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2

ACY1 Others Mouse 小鼠 ACY1 / Aminoacylase-1 人细胞裂解液 (阳性对照)
大鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

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