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蛋白酶抑制剂混合物片剂(含EDTA)1片实验方法注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首*行Annexin V-FITC染色,短可在上机前5分钟再加入PI染色。
蛋白酶抑制剂混合物片剂(含EDTA)1片实验方法实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会*丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
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NRG1 Protein Human 重组人 NRG1-beta 1 蛋白 (EGF Domain, Fc 标签)
大鼠上皮细胞*培养基 100mL
ANTXR1 Others Human 人 ANTXR1 人细胞裂解液 (阳性对照)
LTPA小鼠胰腺癌细胞 LTPA mouse pancreatic cancer cells 1640+10%FBS
小鼠淋巴成纤维细胞MLF
PC-3M(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 视网膜微血管内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
人肺腺癌细胞;Calu-3
CSF1R Others Human 人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
CM-H102表皮角化细胞*培养基100mL
HCT116, 人结直肠癌细胞 垂体瘤,AtT20细胞 COS-7(非洲青猴肾细胞)
小鼠胚胎成纤维细胞;PA317
CD86 Others Mouse 小鼠 CD86 / B7-2 人细胞裂解液 (阳性对照)
ERBB4 Others Mouse 小鼠 HER4 / ErbB4 人细胞裂解液 (阳性对照)
人牙周膜成纤维细胞cDNAHPLF cDNA
人皮肤肥大细胞*培养基 100mL
ψ2细胞,小鼠胚成纤维包装细胞 Jecket(淋巴瘤细胞) 大鼠肺细胞;WTRL1
EFNA5 Protein Rat 重组大鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (His 标签)
A-498(人肾癌细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠单核巨噬细胞;J774A.1
大鼠转化生长因子β3(TGF-β3)ELISA试剂盒 ,英文名: TGF-β3 ELISA Kit
人肾上腺素能a1A受体(ADRA1A)ELISA检测试剂盒Humanadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1AELISAKit 96T/48T
大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)免疫试剂盒 Rat corticotropin releasing hormone,CRH ELISA Kit
CLIAKitforTpP(Mousethrombusprecursorprotein)ELISAKit小鼠血栓前体蛋白规格:48T/96T
氢离子膜通道转运功能(V型ATP酶)绿色荧光检测试剂盒20次
ELISAKitAGPA/PCA人抗胃壁细胞抗体规格:48T/96T
人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Rat tumor necrosis factor soluble receptor I (TNFsR- I) ELISA Kit 大鼠坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒
HumanHeatShockProtein70,HSP-70ELISAKit 人热休克蛋白70(HSP-70)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Humanimmunoglobulinheavychain,IgHELISA试剂盒*重链(IgH)ELISA试剂盒规格:96T/48T
组织基质金属蛋白酶(MMP-12)活性荧光定量检测试剂盒20次
HumanleukocyteantigenG,HLA-GELISAKit人类白细胞抗原G(HLA-G)ELISA试剂盒规格:96T/48T
蛋白酶抑制剂混合物片剂(含EDTA)1片实验方法大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
大鼠果糖胺(FA)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
大鼠胱天蛋白酶8(Casp-8)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
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