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细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
公司细胞现货供应，质量有保证、*、实验效果好，我司为您提供免费代测服务，同时提供最新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
产品名称 | 小鼠胚胎细胞：SC-1 |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
分类 | 细胞系 |
货号 | GOY-01X0430 |
商品介绍：
名称 小鼠胚胎细胞：SC-1 别称SC-1; SC1; Scott; Sci-1; SCI-1; SCI1 年龄（性别）胚胎 生长特性贴壁细胞 细胞形态成纤维细胞样 生长培养基MEM＋10% FBS＋1% P/S 推荐传代比例1:2-1:4 推荐换液频率2~3次/周 倍增时间~30 hours 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ |
使用方法：
收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
食蟹猴 CD200 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
食蟹猴 Epcr / PROCR 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
食蟹猴 DDR2 Kinase 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
食蟹猴 CD160 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
食蟹猴 RBP4 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
食蟹猴 PDGFRB / PDGFR-1 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
食蟹猴 CTLA4 / CD152 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
食蟹猴 TNFR2 / CD120b /
小鼠胚胎细胞：SC-1 NUMB 膜相关蛋白Numb抗体 规格: 0.2ml
GAJ/MND1 减数分裂核分裂蛋白1抗体 规格: 0.2ml
Lpin1 protein Lpin1 抗体 规格: 0.2ml
LAIR-2/CD306 白细胞相关免疫球蛋白样受体2抗体 规格: 0.1mlDonkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy3 PE-Cy3标记的驴抗豚鼠IgG 规格: 0.1ml
phospho-CDK6 (Tyr13) 磷酸化周期素依赖性激6抗体 规格: 0.1ml
phospho-CaMK2 alpha (Thr305) 磷酸化钙/钙调素依赖蛋白激2α抗体 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/Cy7 Cy7标记的兔抗人IgG F(ab')2 规格: 0.1ml
NRG3 神经调节蛋白3抗体 规格: 0.2ml
CANX/Calnexin 钙连蛋白抗体 规格: 0.1ml
Goat Anti-Chicken IgG/APC APC标记的羊抗鸡IgG 规格: 0.1ml
卫矛醇半固体琼脂 Dulcitol Semisolid Agar 10
50次 脉冲电泳Marker（低范围PFG）
