细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
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产品名称 | 胚肺细胞：MRC-5 |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
分类 | 细胞系 |
货号 | GOY-01X0160 |
商品介绍：
名称 胚肺细胞：MRC-5 别称MRC5; MRC 5; MRCV; MRC-V; Medical Research Council cell strain-5 种属人类 年龄（性别）胎儿,14周龄 组织来源肺 生长特性贴壁细胞 细胞形态成纤维细胞样 背景描述MRC-5细胞来自14周龄男性胎儿的正常肺组织；MRC-5细胞老化前能传代42-46次群体倍增。MRC-5细胞是正常二倍体细胞系，46条染色体、XY核型。模式染色体数为46，概率为70%。 生物安全等级1 生长培养基MEM＋10% FBS＋1% P/S 推荐传代比例1:2-1:4 推荐换液频率2~3次/周 倍增时间~36-96小时 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ 注意事项该细胞为有限传代细胞系，请注意代次控制。 |
使用方法：
收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
大鼠 CRP 基因全长ORF克隆
大鼠 CystatinC / CST3 基因全长ORF克隆
大鼠 CXCL1 基因全长ORF克隆
大鼠 CCL5 基因全长ORF克隆
大鼠 CCL4 基因全长ORF克隆
大鼠 CCL20 基因全长ORF克隆
大鼠 CCL2 / MCP-1 基因全长ORF克隆
大鼠 BOK 基因全长ORF克隆
大鼠 CD62E / E-Selectin 基因全长ORF克隆
大鼠 MSTN 基因全长ORF克隆
胚肺细胞：MRC-5 碱性L-G培养基基础 250g
含TSA平板 9cm*10/包
Phospho-PAK4(Ser474)/PAK5(Ser602)/PAK6(Ser560) 磷酸化p21激活激4/5/6抗体 规格: 0.1mlPlexin A1 神经丛蛋白A1抗体 规格: 0.2ml
Pancreatic Lipase 胰脂肪抗体 规格: 0.1ml
IL-33 白介素33抗体 规格: 0.1mlIL-15 白介素15抗体 规格: 0.1ml
Laminin 5 层粘连蛋白5(laminin γ2)抗体 规格: 0.2ml
LC3C 微管相关蛋白轻链3C抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-human IgG/Cy7 Cy7标记的兔抗人IgG 规格: 0.1ml
phospho-M-CSF Receptor(Tyr708) 磷酸化巨噬细胞集落刺激因子受体抗体 规格: 0.1mlEIF2AK2/PKR 蛋白激R抗体 规格: 0.1ml
phospho-MEK5(Ser129) 磷酸化丝裂原活化蛋白激激5抗体 规格: 0.1ml
TOPO II/TOPO II Alpha DNA拓普西异构Ⅱ抗体 规格: 0.1ml
接种测试微生物琼脂培养基 Medium Ⅱ(for Transferring the Test Organism) 250g
ZSWIM2 E3泛素蛋白连接ZSWIM2抗体 规格: 0.2ml
