PCR实验步骤:
典型的PCR由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。
其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板，操作简单，定量准确快速。
2. 引物经过优化，特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照，便于分析试验结果。
产品名称 | 柯萨奇病毒B1型荧光PCR法检测试剂盒 |
规格 | 50T |
货号 | CP99274 |
特点优势：
1. 特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
6. 优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
荧光定量PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
110697-44-4 H-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-OH 1mg Jamestown Canyon Virus (JCV)詹姆士城峡谷病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
110697-44-4 H-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-OH 5mg Jamestown Canyon Virus (JCV)詹姆士城峡谷病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
110703-94-1 Zopolrestat 10mg Cytoplasmic Polyhedrosis Virus(CPV)质型多角体病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
110703-94-1 Zopolrestat 1mg Enteropathogenic E.coli(EPEC)肠致病性大肠杆菌（大肠埃希氏菌）LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
110703-94-1 Zopolrestat 5mg Enteropathogenic E.coli(EPEC)肠致病性大肠杆菌（大肠埃希氏菌）LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
辛基基氯化铵;八烷基基氯化铵Trimethyloctylammonium chloride 质量规格：>99%,BR 大鼠绒毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA检测试剂盒RatChorionicGonadoophinβ,β-CGELISAKit 96T/48T ChickenSolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1ELISA试剂盒鸡可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
DMSDMS质量规格：BR 人大肠癌专一抗原2(CCSA-2)试剂盒 Human colon cancer-specific aigen-2,CCSA-2 ELISA kit Humanadiposediffereiation-relatedprotein，ADRPELISAKit人脂肪分化相关蛋白(ADRP)ELISA试剂盒规格：96T/48T
D-正亮氨酸(>99%,BC)D-Norleucine质量规格：>99%,BC Ratpyridiniumcrosslink/PyriLinks,PYELISAKit大鼠交联物(PY)ELISA试剂盒规格：96T/48T 人雌二醇(E2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
盐酸多巴胺Dopamine 质量规格：>98%,BR HIS(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升 豚鼠坏死因子α(TNF-α)试剂盒 Guinea pig Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA Kit
柯萨奇病毒B1型荧光PCR法检测试剂盒CD52 Others Rat 大鼠 CD52 / CDW52 人细胞裂解液 (阳性对照) 炔雌醇质量规格：>98%,可用于细胞培养Ethiny Estradiol
人视网膜色素上皮细胞*培养基 100mL乙硫异烟胺,硫异烟胺质量规格：>98.5%amide
TMNE细胞，化学转化小鼠鼻咽上皮细胞 C6(脑胶质瘤细胞) 牛肾细胞;MDBK酪氨酸脱羧酶质量规格：>0.1 U/mg,BCTyrosine decarboxylase
EFNB1 Protein Human 重组人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 标签)维多利亚蓝 R质量规格：染料含量：>80%,BSVictoria blue R
ECV-304(人脐静脉内皮细胞) 5×106cells/瓶×2 肺成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)α-酮戊二酸单钾盐(>98%，BR)质量规格：>98%，BRα-Ketoglutaric acid potassium salt
