T25m2 小鼠胰岛细胞说明

收到冻存细胞的处理方法：
1.37°C水浴预热培养基；
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；
3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；
4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀；
5.置于37°C，5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧)；
6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。

小鼠胰岛细胞【Mouse Islet ：Islet Cells 】产品描述：提供的原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据国际标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时保证质量的稳定。在生物技术部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。
发货：客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。提供的细胞有标准的鉴定流程，保证细胞的纯度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右*培养基；2、说明书及注意事项；3、售后服务标准。
保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研，不得用于临床应用。

实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造，并经过铬酸洗液处理； 
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
1.接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色
，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。
 人基膜聚糖/内腔蛋白(LUM)试剂盒 Human lumican,LUM ELISA Kit 甜菜碱（标准品）  Betaine  质量规格：HPLC≥98%，标准品

人基质γ羧基谷氨酸蛋白(MGP)ELISA检测试剂盒HumanMaixGlaProtein,MGP 96T/48T 甜菜碱  Betaine  质量规格：>99%,无水高

人基质γ羧基谷氨酸蛋白(MGP)试剂盒 Human MGP ELISA Kit 尿酸  Uric acid  质量规格：0.99

人基质金属蛋白酶1(MMP-1)试剂盒 Human Maix metalloproteinase 1,MMP-1 ELISA kit 尿酸(标准品)  Uric acid  质量规格：HPLC>99%,标准品

人基质金属蛋白酶10(MMP-10)试剂盒 Human Maix metalloproteinase 10,MMP-10 ELISA kit 度米芬  Domiphen bromide  质量规格：>98%,AR

人基质金属蛋白酶12(MMP-12)试剂盒 Human Maix Metalloproteinase 12,MMP-12 ELISA Kit 甜菜碱，一水  Betaine monohydrate  质量规格：>99%,BR

人基质金属蛋白酶13(MMP-13)试剂盒 Human Maix metalloproteinase 13,MMP-13 ELISA kit 萘酚AS-D-乙酸酯  Naphthol AS-D acetate  质量规格：0.98

人基质金属蛋白酶14(MMP-14)试剂盒 Human Maix Metalloproteinase 14,MMP-14 ELISA Kit 锌原卟啉  Zinc protoporphyrin  质量规格：进分

人基质金属蛋白酶1酶原(Pro-MMP-1)试剂盒 Human Pro-Maix Metalloproteinase 1,Pro-MMP-1 ELISA Kit 美伐他汀,康百汀  Mevastatin  质量规格：>97%,BR,可用于细胞培养

人基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)试剂盒 Human Maix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA kit 美伐他汀(标准品)  Mevastatin  质量规格：>95%,标准品，用于含量测定
枣椰树(datepalm)培养基500毫升溶液/片剂 非布索坦  Febuxostat  质量规格：≥99%

MouseDehydroepiandrosterone,DHEAELISAKit小鼠脱氢表雄同(DHEA)ELISA试剂盒规格：96T/48T 非布索坦(标准品)  Febuxostat  质量规格：HPLC≥98%,标准品

小鼠双氢(DHT)ELISA试剂盒 ，英文名： DHT ELISA Kit 非那西丁  Phenacetin  质量规格：>99%,AR

小鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA检测试剂盒MouseVascularEndothelialcellGrowthFactor,VEGFELISAKIT 96T/48T 非那西丁(标准品)  Phenacetin  质量规格：HPLC>98%,标准品

人高香草酸(HVA)试剂盒 Human Homovanillic acid,HVA ELISA Kit 盐酸芬戈莫德  Fingolimod HCL /FTY-720  质量规格：≥99.0%,BR,可用于细胞培养

RatgranzymesB,Gzms-BELISAKit大鼠颗粒酶B(Gzms-B)ELISA试剂盒规格：96T/48T 盐酸芬戈莫德(标准品)  Fingolimod HCL /FTY-720  质量规格：HPLC≥98%,标准品

BAD蛋白共沉淀分析试剂盒5 氟芬那酸,氟灭酸  Flufenamic acid  质量规格：>99%

MouseinhibinB,INH-BELISA试剂盒小鼠抑制素B(INH-B)ELISA试剂盒规格：96T/48T 氟芬那酸,氟灭酸(标准品)  Flufenamic acid  质量规格：HPLC≥99%,标准品

小鼠双酪酸(dityrosine)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 氟马西尼/氟马泽尼  Flumazenil  质量规格：>99%,USP31

Rat maix metalloproteinase 13 (MMP-13) ELISA Kit 大鼠基质金属蛋白酶13(MMP-13)ELISA试剂盒 氟马西尼/氟马泽尼(标准品)  Flumazenil  质量规格：>99%,标准品
小鼠胰岛细胞说明大鼠白介素23(IL-23)ELISA检测试剂盒RatIerleukin23,IL-23ELISAKit 96T/48T 柠檬酸 HPLC≥98% 5mg

大鼠白三烯C4(LTC4)ELISA检测试剂盒RatLeukoieneC4,LT-C4ELISAKit 96T/48T 柠檬酸 HPLC≥98% 200mg

大鼠白三烯E4(LTE4)ELISA检测试剂盒RatleukoieneE4,LT-E4ELISAKit 96T/48T 柠檬醛(>95%,Pract Grade)  Citral  质量规格：>95%,Pract Grade

大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA检测试剂盒RatCystatinC,Cys-CELISAKit 96T/48T 柠檬醛 GC≥95% 0.5ml

大鼠补体蛋白3(C3)ELISA检测试剂盒RatCompleme3,C3ELISAKit 96T/48T 柠檬苦素；吴茱萸内酯(标准品,吴茱萸提取)  Limonin  质量规格：HPLC≥98%，标准品,吴茱萸提取

大鼠补体蛋白4(C4)ELISA检测试剂盒RatCompleme4,C4ELISAKit 96T/48T 柠檬苦素，黄柏内酯(橙皮提取)   Limonin  质量规格：HPLC≥98%,橙皮提取

大鼠补体片断3a(C3a)ELISA检测试剂盒RatComplemefragme3a,C3aELISAKit 96T/48T 柠檬苦素，黄柏内酯(标准品,橙皮提取)   Limonin  质量规格：HPLC≥98%,标准品,橙皮提取

大鼠补体片断5a(C5a)ELISA检测试剂盒RatComplemefragme5a,C5aELISAKit 96T/48T 柠檬苦素 HPLC≥98% 20mg

大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA检测试剂盒RathighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 96T/48T 柠檬黄素 HPLC≥95% 20mg

大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA检测试剂盒RatSuperOxidaseDimase,SODELISAKit 96T/48T 镍粉(>99.5%,SP)  Nickel powder  质量规格：>99.5%,SP