PCR的反应条件：
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。
如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。
参数规格：
产品名称：副猪嗜血杆菌(HPS)核酸检测试剂盒
产品规格：50T
产品货号：FS-P10293
产品分类：荧光PCR法
产品运输：低温运输
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性*定量方法，已得到的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
铜绿假单胞菌海洋石油污染生物修复/生物活性物质筛选模式菌株: no水样/近海海水提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 471生长条件: 28℃
-244℃冰箱冻结；真空冷冻干燥
膜醭假丝酵母培养基: 0013模式菌株: no土壤提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 25-28℃ 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法
干酪乳杆菌干酪亚种乳制品、谷物制品、面包、乳菌制剂、饲料添加剂等。模式菌株: no泡菜(萝卜,白菜)提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: CM0006生长条件: 37℃
米根霉培养基: CM0014腐乳。提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 25-28℃ 真空冷冻干燥法
大肠埃希氏菌培养基: 304用作阿特拉津降解细菌atzE基因DNA杂交的探针。提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 37℃ -80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法
暗棕色杆菌培养基: 471近海细菌沉积物/表层沉积物提供形式: 斜面培养物模式菌株: no生长条件: 20-25℃ 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法
传染性支气管炎病研究模式菌株: no病鸡气管、肺脏及内脏器官提供形式: 冻干物安全等级: 2培养基: 0生长条件: 37
-245℃冰箱冻结；真空冷冻干燥
枯草芽孢杆菌抑制梨黑霉病原菌模式菌株: no大皂角提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: CM0003生长条件: 35-37℃
致病性大肠埃希菌生长条件: 37℃培养基: CM0051提供形式: 冻干物安全等级: 2模式菌株: no 真空冷冻干燥法
产黄青霉深海丝状真菌模式菌株: no沉积物/深海沉积物提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: 14生长条件: 28℃
30071,3,19 g,s,t -模式菌株: no种属: Salmonella│senftenberg提供形式: 冻干物安全等级: 2培养基: CM0051生长条件: 37℃
紫产色链霉菌生长条件: 28℃培养基: 0027提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no 液氮超低温冻结法；矿物油法；定期移植法
季也蒙假丝酵母果生变种培养基: CM0077酿造酱油。提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28-30℃ 真空冷冻干燥法
-246℃冰箱冻结；真空冷冻干燥
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