产品介绍:
用途: 软骨染色,主要显示透明软骨 注意事项: 有碳酸钾、美蓝等组成。 储存条件:室温,避光,12个月 |
中文名称:Unna碱性美蓝染色液
英文名称:
产品规格:100ml
货号:FS-X9941
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
枯草芽孢杆菌锌指蛋白851抗体Human FGFBP2 豚鼠胆囊收缩/肠促胰肽(CCK)免疫试剂盒
草分枝杆菌嗜乳脂蛋白2亚型A1抗体Human FKBP10 豚鼠脂(CHE)免疫试剂盒
线壳囊孢(座线孢)磷化c-fos抗体Human FKBP1A 豚鼠单核趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)免疫试剂盒
百脉根中间根瘤菌磷化c-fos抗体Human FKBP14 豚鼠单核趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫试剂盒
烟色齿耳磷化原癌基因c-Jun抗体Human FGFR1OP 豚鼠单氧化(MAO)免疫试剂盒
栎金钱菌磷化原癌基因c-kit抗体Human FGFBP3 豚鼠催产(OT)免疫试剂盒
反硝化盐单胞菌1号染色体开放阅读框148抗体Human FNDC3A 豚鼠促肾上腺皮质激(ACTH)免疫试剂盒
薄层菌属性T抗原-4抗体Human FKBP1B 豚鼠促卵泡(FSH)免疫试剂盒
细链格孢钙调调节蛋白相关蛋白抗体Human FN3KRP 豚鼠雌激(estrogen)免疫试剂盒
暗拟茎点霉(可订购)紧密连接蛋白1抗体Human FNTA 豚鼠肠脂肪结合蛋白(iFABP)免疫试剂盒
产卟啉杆菌1号染色体开放阅读框149抗体Human FNIP1(Folliculin-interacting protein 1) 豚鼠表皮生长因子(EGF)免疫试剂盒
产黑链霉菌磷化原癌基因c-kit抗体Human FLCN 豚鼠白三烯D4(LTD4)免疫试剂盒
针叶树散斑壳磷化原癌基因c-kit抗体Human FLJ25006 豚鼠白三烯B4(LTB4)免疫试剂盒
球孢白僵菌磷化淋巴衍生C-型凝集抗体Human FLJ10357 豚鼠白介8(IL-8)免疫试剂盒
葡萄座腔菌2号染色体开放阅读框39抗体Human FLI1 豚鼠白介6(IL-6)免疫试剂盒
稻生黄单胞菌2号染色体开放阅读框49抗体Human FMN1 豚鼠白介5(IL-5)免疫试剂盒
根瘤菌Rhizobium│sp. 质量规格:>98%,BRα1微球蛋白/bikunin前体试剂盒5-羟基马鞭草
沙漠奇异球菌Deinococcus│deserti 质量规格:>99%,BRα1性糖蛋白试剂盒去氧基醉椒
大肠埃希氏菌Escherichia│coli 质量规格:>98%,BRα1抗胰糜蛋白试剂盒去氢骆驼蓬碱
Unna碱性美蓝染色液朱黄篮状 FMOC-D-1,2,3,4-四氢-Β-咔啉-3-羧β2巨球蛋白
Paenibacillus durus 2,3,7,8,12,13,17,18-八乙基-21H,23H-卟吩α-烯化
解脂假丝酵母 3-氨基-2,2-二甲基-1-(草盐形式)α-烯化
加德纳 8-苯基辛胸腺表达趋化因子
长蠕孢 N-(4-溴苯基)硫脲再生胰岛衍生蛋白4
褐囊蜜环 N-3-异恶唑叔丁酯p物质前提
野土地杆 5-溴-2-呋喃甲酰肼EB病包膜糖蛋白gp350抗体
酿酒酵母 4-硝基马尿MG29抗体
不产色链霉不产色亚种 4-氨基邻甲组释放因子
酿酒酵母 2-溴-1,3-二-5-氟苯磷化肝生长因子受体
噬果胶黄杆 3--1,2,3-三羧map2k5
地衣芽孢杆 3-氧杂环丁烷支原体IgG抗体
康宁木霉 3-二氟甲氧基衣原体抗体IgG
相思根瘤 4-甲氧基-2-乙肺炎支原体IgM抗体
膨端青霉 2,4-二羟基-3-硝基吡啶肌抗体