产品介绍:
用途: 肥大细胞脱颗粒染色 注意事项: 肥大细胞呈紫色至深紫色,弹力纤维呈紫色,红细胞呈橙黄色,其余组织呈淡黄色,其他细胞多不着色。 储存条件:4℃,避光,12个月 |
中文名称:肥大细胞染色液(醛品红-橙黄G法)
英文名称:
产品规格:4×20ml|4×50ml
货号:FS-X9898
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
固氮菌聚集蛋白抗体Human KHDC1 小鼠热休克因子1(HSF1)免疫试剂盒
葡萄座腔菌调亡诱导因子抗体Human KHDC3L 小鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)免疫试剂盒
柠檬黄色红色杆菌调亡诱导因子抗体Human KDSR 小鼠热休克蛋白90(HSP-90)免疫试剂盒
中国台湾根霉间变型淋巴瘤激抗体Human KHSRP 小鼠热休克蛋白70(HSP-70)免疫试剂盒
烟色拟盘多毛孢α-甲基酰基消旋抗体Human KHDRBS3 小鼠热休克蛋白60(Hsp-60)免疫试剂盒
假单胞菌属膜粘连蛋白A1抗体Human KIF1C 小鼠热休克蛋白40(Hsp-40)免疫试剂盒
葡萄座腔菌自噬相关蛋白1抗体Human KIF20A 小鼠热休克蛋白27(HSP-27)免疫试剂盒
胶孢β淀粉样肽1-16/Aβ1-16 抗体Human KIAA1191 小鼠热休克蛋白20(Hsp-20)免疫试剂盒
洋葱伯克霍尔德氏菌腺瘤肉调节蛋白抗体Human KIAA1468 小鼠缺血修饰白蛋白(IMA)免疫试剂盒
乳粉 乳菌计数 衔接因子蛋白含pH域蛋白1抗体Human CEMIP(Cell migRation-inducing and hyaluronan-binding protein) 小鼠固(ALD)免疫试剂盒
德氏乳杆菌德氏亚种水通道蛋白-7抗体Human KIAA1429 小鼠去甲肾上腺(NA)免疫试剂盒
波兰青霉谷基转移1抗体Human KIAA1530 小鼠趋化因子配体1(CCL1)免疫试剂盒
枯草芽孢杆菌p21活化蛋白激ARHG7抗体Human KIAA1602 小鼠趋化因子(FK)免疫试剂盒
三宝垄根霉磷化肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体Human KIDINS220 小鼠趋化因子(CC基序)配体2(MRC2)免疫试剂盒
浅黄微杆菌2-基乙硫双加氧抗体Human KIAA0430 小鼠(HYD)免疫试剂盒
松杉灵芝血管紧张Ⅱ-1型受体抗体Human KIAA1984 小鼠羟甲基戊二单酰还原(HMG-CoAR)免疫试剂盒
球毛壳Chaetomium│globosum Kunze 质量规格:>98~102%,BR白介2诱导的T激试剂盒香蜂草
蘑菇轮枝菌Verticillium│psalliotae 质量规格:>97%,分子生物学级白介2受体试剂盒香紫苏内酯
: AS3.14资源名称: 曲霉 质量规格:活:> 30 U/mg,BC白介2可溶性受体β链试剂盒胸腺
肥大细胞染色液(醛品红-橙黄G法)绿色木霉 苯硫基乙胃癌抗原MG7
扩展青霉 3-(2-吡啶基氨基)乙酯I
姬菇 1-苯基氨基脲III
2--3-氟IV
卫矛 3-(4-溴苯基)-9-苯基-9H-咔唑V
枯草芽孢杆 2-甲氧基-3-溴-5-吡啶Ⅶ
黄海鞘氨盒 氧化异佛尔酮Ⅷ
香菇 3-甲基-2-苯基吡啶Ⅸ
伯顿丝孢毕赤酵母 L-3-环基Ⅺ
巴斯德毕赤酵母 3--5-甲氧基苯XII
费氏中华根瘤 3-溴苄Ⅱ
美澳型核果褐腐病 Fmoc-L-苯甘2,3-双加氧1
鞘氨单胞 N,N'-二苄基-1,3-二钙结合蛋白B1
银杏盘多毛孢 2,3-二磷脂A2
pESC-Ura 4'-甲氧基-2-苯基苯乙酮elabela