培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称:XTT细菌增殖及细菌毒性检测试剂
英文名称:XTT Bacteria Proliferation and Cytotoxicity Kit
产品规格:500T|1000T
货号:FS-X9589
产品介绍:
XTT(二甲氧唑黄)是一种类似于MTT 的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,活细菌线粒体中存在与辅酶Ⅱ相关的脱氢酶,可将黄色的XTT 还原成水溶性的橘黄色的甲月赞。生成的甲臜能够溶解在组织培养基中,不形成颗粒,可直接用酶联免疫检测仪检测定吸光值。 操作方法 1. 96 孔板加入细菌100μL/孔(约1×104),置37℃ 5%CO2 细菌培养箱培养24 小时。2.加入适当浓度的受试化合物。3.将96 孔板在37℃,含5% CO2 空气及100%湿度的细菌培养箱中孵育适当时间。 4. 向各孔中加入20 μl 的XTT 工作液。 5. 37℃下孵育1~4 小时。 6. 酶标仪在450nm 波长处检测每孔的光密度。 |
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
多巴an-β羟化mei(DBH)elisa检测试剂盒 英文名称:DBH ELISA Kit,DBH,
低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)elisa检测试剂盒 英文名称:LRP-1 ELISA Kit,LRP-1,
胆suan(CA)elisa检测试剂盒 英文名称:CA ELISA Kit,CA,
促肾上腺皮质激su释放因子(CRF)elisa检测试剂盒 英文名称:CRF ELISA Kit,CRF,
脑肠肽(BGP/Gehrelin)elisa检测试剂盒 英文名称:BGP/Gehrelin ELISA Kit,BGP/Gehrelin,
磷脂酰乙chun(PEth)elisa检测试剂盒 英文名称:PEth ELISA Kit,PEth,
免疫球蛋白A(IgA)elisa检测试剂盒 英文名称:IgA ELISA Kit,IgA,
粒细胞集落刺激因子(G-CSF)elisa检测试剂盒 英文名称:G-CSF ELISA Kit,G-CSF,
可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)elisa检测试剂盒 英文名称:VEGFR-2/sFLK-1 ELISA Kit,VEGFR-2/sFLK-1,
人抗子宫内膜抗体(EMAb)elisa检测试剂盒 英文名称:EMAb ELISA Kit,EMAb,
人抗双链DNA抗体/天然DNA抗体(dsDNA)elisa检测试剂盒 英文名称:dsDNA ELISA Kit,dsDNA,
人抗酒石suansuan性磷suanmei5b(TRACP-5b)elisa检测试剂盒 英文名称:TRACP-5b ELISA Kit,TRACP-5b,
人抗补体1q抗体(C1q)elisa检测试剂盒 英文名称:C1q ELISA Kit,C1q,
精氨suan脱羧mei(ADC)elisa检测试剂盒 英文名称:ADC ELISA Kit,ADC,
降钙su原(PCT)elisa检测试剂盒 英文名称:PCT ELISA Kit,PCT,
促胰液su受体(SCTR)检测试剂盒 forSecretinReceptor(SCTR)
前列腺suE合mei2(PTGES2)检测试剂盒 forProstaglandinESynthase2(PTGES2)
XTT细菌增殖及细菌毒性检测试剂非那西汀熔点标准标准品 规格:500mg 英文名称:
丙戊suan相关物质B标准品 规格:50mg 英文名称:
醋suan去氨加压su标准品 规格:1.91mg 英文名称:
羟可待tong鉴别标准品 规格:15mg 英文名称:Oxytocin Identification
盐suan多巴an标准品 规格:200mg 英文名称:Dopamine Hydrochloride
磺an醋酰钠标准品 规格:500mg 英文名称:Sulfacetamide Sodium
盐suan环ben扎林标准品 规格:200mg 英文名称:Cyclobenzaprine Hydrochloride
地红霉su标准品 规格:200mg 英文名称:Dirithromycin
奥克立林标准品 规格:500mg 英文名称:Octocrylene
L-亮氨suan标准品 规格:200mg 英文名称:L-Leucine
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)