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中文名称：CCCP(50mM) 细胞凋亡诱导剂
英文名称：
产品规格：100μl
货号：FS-X9633
产品介绍:
本品是溶于DMSO的CCCP溶液，浓度为50mM，体积为100μl（相当于1mg的总量），常用作一种阳性对照来诱导细胞凋亡，并配合线粒体膜电位检测探针JC-1或者JC-10来进行相关研究。 CCCP，即Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone，一种质子载体（H+ ionophore），是一种强效的线粒体氧化磷酸化解偶联剂，促使线粒体内膜对H+产生通透性，导致线粒体内膜两侧的膜电位丧失，诱导凋亡发生。也可作用于叶绿体膜，抑制光合作用；CCCP还可抑制内质网-高尔基体（ER-Golgi）之间的蛋白转运，高亲和力结合细胞色素氧化酶。 CCCP还具有其他功能： 1）在牛蛙交感神经方面的实验表明，CCCP 可增强促黄体生成素释放激素的释放； 2）作为一种质子导体在葡萄糖存在的情况下影响E.coli 细胞活性； 3）对细胞内钙水平的各种调节效应； 4）抑制脂肝酶的分泌； 5）部分抑制pH梯度活化的Cl-摄取以及刷状缘膜的Cl-/Cl-交换等。 储存条件：-20℃，有效期12个月 |
培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
细胞外信号调节激mei2(ERK2)检测试剂盒 forExtracellularSignalRegulatedKinase2(ERK2)
核因子κB受体激活因子配基(RANκL)检测试剂盒 forReceptorActivatorOfNuclearFactorKappaBLigand(RANkL)
RAD51同源物(RAD51)检测试剂盒 forRAD51Homolog(RAD51)
组an-N-jia基转移mei(HNMT)检测试剂盒 forHistamine-N-Methyltransferase(HNMT)
唾液suan转移mei7E(SIAT7E)检测试剂盒 forSialyltransferase7E(SIAT7E)
血小板激活因子乙酰水解mei2(PAFAH2)检测试剂盒 forPlateletActivatingFactorAcetylhydrolase2(PAFAH2)
巨噬细胞移动抑制因子(MIF)检测试剂盒 forMacrophageMigrationInhibitoryFactor(MIF)
jia基多巴1α(MEP1α)检测试剂盒 forMeprinAAlpha(MEP1a)
肿瘤坏死因子受体超家族成员1A(TNFRSF1A)检测试剂盒 forTumorNecrosisFactorReceptorSuperfamily,Member1A(TNFRSF1A)
促生长激su释放激su(GHRH)检测试剂盒 forGrowthHormoneReleasingHormone(GHRH)
分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)检测试剂盒 forSecretedFrizzledRelatedProtein5(SFRP5)
矢车菊δ2(CENTδ2)检测试剂盒 forCentaurinDelta2(CENTd2)
突触囊泡蛋白Ⅻ(SYT12)检测试剂盒 forSynaptotagminXII(SYT12)
Ⅰ型胶原α2(COL1α2)检测试剂盒 forCollagenTypeIAlpha2(COL1a2)
蛋白二硫键异构mei(PDI)检测试剂盒 forProteinDisulfideIsomerase(PDI)
氨基端前脑钠su(NT-ProBNP)检测试剂盒 forN-TerminalProBrainNatriureticPeptide(NT-ProBNP)
ben丙氨suan羟化mei(PAH)检测试剂盒 forPhenylalanineHydroxylase(PAH)
CCCP(50mM) 细胞凋亡诱导剂jia基多巴标准品 规格:500mg 英文名称：Methyldopa
苄星青霉su标准品 规格:200mg 英文名称：Penicillin G Benzathine
盐suan赛庚啶标准品 规格:500mg 英文名称：Cyproheptadine Hydrochloride
度suan标准品 规格:400mg 英文名称：Etodolac
泰诺福韦杂质B标准品 规格:10mg 英文名称：
地丹诺辛相关物质B标准品 规格:25mg 英文名称：
黄豆黄su标准品 规格:15mg 英文名称：Glycitein
乙氧酰anbenjia酯相关物质A标准品 规格:25mg 英文名称：Ethopabate Related Compound A
舒芬标准品 规格:200mg 英文名称：Suprofen
硬脂富马suan钠标准品 规格:200mg 英文名称：Sodium Stearyl Fumarate
