产品介绍:
用途: 用于真菌(马尔尼菲青霉菌)和卡氏肺囊虫类生物的染色 注意事项: 固定,石蜡包埋。真菌、肺囊虫、黑色素染为棕黑色或黑色,背景为橙黄色。 储存条件:4℃,避光,6个月 |
英文名称:
产品规格:5×50ml
货号:FS-X10148
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
葡萄汁有孢汉逊酵母FAM151A蛋白抗体Human B3GAT1 (Galactosylgalactosylxylosylprotein 3-beta-glucuronosyltransferase 1) 牛N端前脑钠(NT-proBNP)免疫试剂盒
复轮生小克银汉霉跨膜蛋白29抗体Human BCO1 (Beta,beta-carotene 15,15′-dioxygenase) 牛D-乳免疫试剂盒
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Priceomyces sp.FRMD4A蛋白抗体Human P2RX7(P2X purinoceptor 7) 牛1,25二羟基维生D3(1,25 DHVD3)免疫试剂盒
阿姆斯特丹曲霉延胡索酰乙酰乙水解抗体Human BFSP1 (Filensin) 绵羊
枯草芽孢杆菌枯草亚种FAM101A蛋白抗体Human BSCL2 (Seipin) 绵羊组(HIS)免疫试剂盒
大肠埃希氏菌FAM102B蛋白抗体Human ATG9B (Autophagy-related protein 9B) 绵羊肿瘤坏死因子α(TNF-α)免疫试剂盒
黑曲霉FAM104B蛋白抗体Human BRI3BP (BRI3-binding protein) 绵羊中性粒明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)免疫试剂盒
谷棒杆菌肾癌下调蛋白1抗体Human ATP2A1 (Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 1) 绵羊脂联(ADIPOQ)免疫试剂盒
*百脉根根瘤菌8/第八/第八因子相关抗原抗体Human ABCA4 (Retinal-specific ATP-binding cassette transporter) 绵羊孕受体(PGR)免疫试剂盒
托湖莱茵海默氏菌胎盘叶受体蛋白2抗体Human ABCB11 (Bile salt export pump) 绵羊孕激/孕(PROG)免疫试剂盒
地衣芽胞杆菌Bacillus│licheniformis 质量规格:standard for GC, ≥99.5% (GC)牛血清白蛋白V
盐田菌Salinicola│sp. 质量规格:analytical standard,≥99.5%(GC)牛磺胆钠
#多主壳菌Botryosphaeria│ribis Grossenb. & Duggar 质量规格:GC,>99.5%(GC)
六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法)恶臭假单胞 2-氟半胱蛋白抑制剂;胱抑C
桃色枝顶孢 4-氟天冬蛋白抑制剂
橘色硬皮马勃 3-氟S1核
Escherichia 吲唑-3-羧刀豆A
马克斯克鲁维酵母 2--4,6-二甲基嘧啶雌二
砖红镰孢 2-氟苯甲基溴孕酮
猪链球 2,4,5-三氟环腺二磷核糖
花盖红菇 5-氟脱镁叶绿a氧化
胶质肉座 (甲氧基)二苯基磷氧谷转氨
根瘤 甲硫基乙乙酯葡聚糖
阪崎肠杆 2-氟羧甲基赖
细链格孢 2-环己基乙多聚半乳糖
木生假丝酵母 2,3-二氢-1,4-苯并二烷-5-羧二烯氧化物环化
酿酒酵母 3-(4-吗啉)-1-l2一氧一植物二烯还原
Glaciihabitans 2-氟-6-髓过氧化物