产品介绍:
产品优势: ◆ 一步转染,转染前和转染后均不需要换液,操作简单; ◆ 高转染效率,低细胞毒性,对细胞生长无影响; ◆ 对贴壁细胞和悬浮细胞的瞬时转染或稳定转染均有效; ◆ 适用于微孔板转染,也适用于生物反应器的大量转染; ◆ 高效转染很多细胞,如293, CHO, COS-7, HeLa, HepG2, MDCK, PC12, HT29, NIH-3T3, MCF7, Vero,SF9等。 保存条件:4°保存,一年有效。 |
中文名称:转染试剂
英文名称:
产品规格:0.75ml/1ml/1.5ml
货号:FS-X9727
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
白介1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)英文名:IL-1sRⅡ 炭疽杆菌抗体包装1g
白介1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)英文名:IL-1sRⅠ 肾上腺皮质发育异常蛋白抗体包装1g
白介1β前体(pro-IL1B)英文名:pro-IL1B 血管紧张Ⅱ1A型受体抗体包装250mg
白介1β(IL-1β)英文名:IL-1β ABI1/SSH3BP1蛋白抗体包装25g
白介1β(IL-1β)英文名:IL-1β 乙酰化组蛋白H1b抗体包装5g
白介1α(IL-1α)英文名:IL-1α 磷化雄激受体抗体包装1g
白介1α(IL-1α)英文名:IL-1α 多功能DNA修复抗体包装5g
白介18结合蛋白(IL-18BP)英文名:IL-18BP AP2关联激1抗体包装1g
白介18(IL-18)英文名:IL-18 通道蛋白1抗体包装200mg
白介18(IL-18)英文名:IL-18 AATK凋亡关联酪激抗体包装100mg
白介17A(IL-17A)英文名:IL-17A ATP结合蛋白家族5抗体包装25g
白介17(IL-17)英文名:IL-17 N-基嘌呤DNA糖基化包装5g
白介16(IL-16)英文名:IL-16 AU5 tag标签抗体包装1g
白介15(IL-15)英文名:IL-15 钙离子ATP通道蛋白抗体包装5g
白介13(IL-13)英文名:IL-13 果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷抗体包装1g
磷化促肾上腺皮质激ACTH抗体基质金属蛋白10(MMP10)ELR510444是新型微管阻断剂,抑制MDA-MB-231增殖的IC50值为30.9nM,非P-gp底物分子。
转染试剂蜡样芽孢杆 N-3,4-二苯(基)硫脲抗肝肾微粒体抗体
板栗蛇孢日规壳 4-叔丁基苯基异酸酯抗肝PF4复合物抗体;HIT抗体
高加索异常倚囊霉 5-溴-2-甲基-4-硝基-1H-咪唑抗肝特异性脂蛋白抗体
外来毛霉橙色变种 2--1,3-二溴苯抗肝膜抗体
累四菲链霉 反-4,4'-二溴芪抗核抗体
鞘氨杆属 5--2-并恶唑抗核周因子抗体
三叶草根瘤 4-异喹啉酸抗环瓜氨酸肽抗体
棒杆 溴化1-癸基-3-甲基咪唑抗肌联蛋白抗体
黄灰链霉 5-甲基噻吩-2-羧酸抗甲型肝炎病IgG抗体
云芝栓孔(变色栓) 4-溴-2-氟苄抗甲型肝炎病IgM抗体
钟器腐霉 1,4-二硝基咪唑抗甲状腺过氧化物抗体
黑曲霉 啶酰抗甲状腺球蛋白抗体
头孢属 5-甲氧基-2-呋喃甲抗甲状腺微粒体抗体
类诺卡氏 2,3-二-4-抗角蛋白丝聚集;丝集蛋白抗体
点枝顶孢 1-甲基-3-乙酸抗酸性磷酸