中文名称:鞭毛染色液(Leifson法)
英文名称:
产品规格:3×50ml
货号:FS-X10115
产品介绍:
用途: 鞭毛染色 注意事项: 又叫利夫森氏染色法,主要由鞣酸、碱性品红等组成,染色后菌体和鞭毛呈红色。 储存条件:室温,避光,12个月 |
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
灰黄青霉DH5α大肠杆菌菌体蛋白抗体Human MSC(Musculin) 人B受体相关蛋白31(BCAP31)免疫试剂盒
谷棒杆菌磷化丝裂原活化蛋白激1/2抗体Human CENPU (Centromere protein U) 人B生长因子(BCGF)免疫试剂盒
酿酒酵母上皮粘附分子抗体Human MKL2 (MKL/myocardin-like protein 2) 人B淋巴瘤因子6(Bcl6)免疫试剂盒
香菇属酪蛋白激受体B2抗体Human MOAP1 (Modulator of apoptosis 1) 人B淋巴瘤-XL(Bcl-xl)免疫试剂盒
少孢酵母表皮生长因子抗体Human MAZ (Myc-associated zinc finger protein) 人B连接蛋白(BLNK)免疫试剂盒
*鸡油菌都不能订购表皮生长因子受体3抗体Human MOB2 (MOB kinase activator 2) 人B活化因子受体(BAFF-R)免疫试剂盒
突脐蠕孢菌酪蛋白激A4受体抗体Human MDGA1 (MAM domain-containing glycosylphosphatidylinositol anchor protein 1) 人B活化因子(BAFF)免疫试剂盒
雀黄链霉菌上皮钙粘附分子抗体Human MPHOSPH10 (U3 small nucleolar ribonucleoprotein protein MPP10) 人Bκ 轻肽基因增强子核因子抑制因子ε(NFKBIE)免疫试剂盒
链格孢红生成受体抗体Human PRX(Periaxin) 人B群链球菌多糖抗体(IgG)免疫试剂盒
克鲁斯假丝酵母脑啡肽抗体Human MKX(Homeobox protein Mohawk) 人B-淋巴趋化因子1(BLC-1/CXCL13)免疫试剂盒
杨齿白木层孔菌EID2蛋白抗体Human MARCO (Macrophage receptor MARCO) 人B淋巴抗原(CD20)免疫试剂盒
大肠杆菌上皮粘附分子抗体Human MST1R(Macrophage-stimulating protein receptor) 人blca-4 免疫试剂盒
淡紫拟青霉红膜相关蛋白ERMAP抗体Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) 人blca-1 免疫试剂盒
菜豆间座壳腺样癌特异性相关抗原EMC1抗体Human SEMG1(Semenogelin-1) 人Bcl-2样蛋白1(BCL2L1)免疫试剂盒
拟粉红锁掷孢酵母腺样癌特异性相关抗原EMC1抗体Human MAD1L1(Mitotic arrest deficient 1-like protein 1) 人B7-H4 免疫试剂盒
斯氏梭菌硫软骨蛋白多糖3抗体Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) 人A组链球菌菌壁多糖抗体(ASP)免疫试剂盒
绿色木霉Trichoderma│viride 质量规格:100μg/ml,u=3%华蟾酥基
荧光假单胞菌生物型FPseudomonas│fluorescens biotype F 质量规格:分析标准品木兰脂
多噬伯克霍尔德氏菌Burkholderia│multivorans 质量规格:分析标准品,≥99.5%(GC)异飞蓟宾
鞭毛染色液(Leifson法)秀珍菇 2-氟苯频呢酯香豆-3-羟化
黑曲霉 3--2-中性转化
气微 4'-羟基-3'-乙酮碱性磷
枯草芽孢杆 4,6-二-5-嘧啶羧甘油三酯
绿粘帚霉 反式-4-乙基环己基酮脱氢
*匍枝根霉 5-溴-1H-吡唑[3,4-B]吡啶乙脱氢
黄玫瑰色诺卡氏 2-氟-5-溴吡啶-3-甲苹果合
冷海水黄杆 3-肼基盐盐脯氧化
洋葱伯克霍尔德 2,6-二-3-基-4-甲基 吡啶氢ATP
扶桑本森顿酵母 2--3-氟苯甲纤维蛋白
粗糙脉孢 5--2-嘧啶合成
解脂亚罗酵母 3,5-二甲黄质脱氢
草菇 [羟基(4-苯丁基)氧膦基]乙苄酯酮脱氢
盐水球形 3-溴-2-甲氧基苯甲苹果脱氢
枯草芽孢杆 N,2-二甲基苄苹果合