本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。参考GB/T 5524 动植物油脂 扦样；GB/T 26635 动植物油脂 生育酚及生育三烯酚含量测定 高效液相色谱法等规程内容。
本文件规定了用高效液相色谱仪同时测定植物油中 α-、β-、γ-、δ-生育酚及 α-、β-、γ-、δ-生育三烯酚含量的方法。本文件方法的检出限为1mg/kg(样品称样量为 0.5g，定容25mL)。
方法原理：
植物油样用正己烷溶解，用甲醇水溶液均质提取后，通过高效液相色谱仪将各单体生育酚和生育三烯酚分离，依据标准溶液色谱保留时间对目标物质定性，采用外标法定量。
仪器：
除常用实验仪器外，还包括以下仪器：
1.高效液相色谱系统。高压泵；进样器；柱温箱：柱温可调节在 30 ℃(可选择)；
荧光检测器：具有295nm 激发波长和330nm 的发射波长；数据处理系统。
推荐使用荧光检测器，若无荧光检测器，也可以使用紫外检测器。如果使用紫外检测器，波长应设置为292nm。
2.高效液相色谱分析柱：可选用 250 mm×4.6 mm，填充平均粒径约为 4 μm 的 Poroshell 120 PFP 柱。注：柱的长度与直径可根据实验条件做相应选择。
3.IKA 均质机。
4.高速冷冻离心机。
5.紫外分光光度计：能在精确波长处准确测定。带10mm比色皿。
6.量简：100mL。
7.移液管：5mL，10mL 和20mL。
8.容量瓶：50mL和25mL。
9.氮吹仪。
标准溶液制备：
用正己烷溶解标准物质，配制生育酚及生育三烯酚标准储备液质量浓度为1.00 mg/mL，转移至棕色标液瓶中，标准储备液置于-18 °C冰箱中避光保存，最多放置一周。用移液管吸取5mL储备液至样品试管中，在温度不超过40℃真空条件下，用氮吹仪除去正己烷。用移液管向试管中注入10mL甲醇(5.2)振荡溶解残余物。用带10mm比色皿的紫外分光光度计(6.5)，在270nm～310nm之间选择适当的波长测吸光度。测得的吸光度应在0.2~0.8之间。用吸光度除以表1中相应的校正系数计算浓度(用mg/mL表示)。
分别移取1mL上述标准储备液于容量瓶中，定容至10mL，得到混合标准中间液。用90%甲醇稀释成0.05, 1, 2, 4, 6, 8, 10 μg/mL的混合标准工作液，现配现用。标准工作液在0 ℃~4 ℃之间避光储存。
试剂瓶外用铝箔包裹。
样品制备：
称取油样0.5g(精确到0.01)于50mL 离心管中，加入0.1g BHT 和1g 抗坏血酸，5mL 正己烷涡旋振荡溶解，加入6mL 90%甲醇，9200(9000) r/min 均质 90 s，4 °C 下离心 5 min，收集水醇层于25mL 容量瓶中，重复3次，最后定容到25mL，过0.22μm 滤膜，待测。
试样测定：
依次将空白溶液和试样溶液注入高效液相色谱仪中，得到色谱图，以色谱保留时间进行定性。根据标准曲线得到试样溶液中不同形式维生素E的浓度，平行测定次数不少于两次。不同形式维生素E色谱图参见附录 A。
重复性：
在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过算术平均值的10%，以大于这两个测定值的算术平均值的10%的情况不超过5%为前提。
再现性：
在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过算术平均值的15%，以大于这两个测定值的算术平均值的15%的情况不超过5%为前提。
更多详情请见附件。
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