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检测
辣根过氧化物酶 (HRP) 和碱性磷酸酶 (ALP) 是 ELISA 分析中使用*泛的两种酶。
要考虑到某些生物材料具有高水平的内源酶活性（例如肺泡细胞中的高水平 ALP、红细胞中的高水平过氧化物酶），这可能会导致非特异性信号。如有必要，用左旋咪唑（针对 ALP）或用 0.3% H2O2 的甲醇溶液（针对过氧化物酶）进行另外的阻断处理。
ALP 底物
对硝基苯磷酸盐 (pNPP) 是大多数应用中广泛使用的底物。在室温下孵育 15-30 分钟后，在 405 nm 处测定硝基苯酚呈现的黄色，加入等体积的 0.75 M NaOH 可终止反应。
HRP 显色液
HRP 的底物为过氧化氢。过氧化氢的裂解与氢供体的氧化偶联，反应期间氢供体的氧化使颜色发生变化。
TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）
每孔添加 TMB 溶液，孵育 15–30 分钟，添加等体积的终止液 (2 M H2SO4)，然后在 450 nm 处读取光密度。
OPD（邻苯二胺2盐酸盐）
在 492 nm 处测定终产物。底物对光敏感，应避光保存。
ABTS（2,2'-联氮-双-[3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸]二铵盐）
终产物为绿色，可在 416 nm 处测定光密度。
某些酶底物被认为是有害的（潜在致癌物），因此始终要小心处理并佩戴手套。
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