13585886131
当前位置：上海邦景实业有限公司>>技术文章>>细胞冷冻保存步骤及注意要点
细胞冷冻保存
步骤：
1. 冷冻前一日前更换半量或全量培养基，观察细胞生长情形。
2. 配制冷冻保存溶液(使用前配制)：将DMSO加入新鲜培养基中，最后浓度为5-10％，混合均匀，置于室温下待用。
3. 按细胞传代培养操作，收集培养之细胞，取少量细胞悬浮液((约0.1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。
4. 离心，去除上清液，加入适量冷冻保存溶液，使细胞浓度为1-5x106cells/ml，混合均匀，分装于已标示*之冷冻保存管中1ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。
5. 冷冻保存方法1: 冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16～18小时(或隔夜)→液氮槽vapor phase长期储存。
6. 冷冻保存方法2: 冷冻管置于含异丙醇的程序降温盒中，直接放入-80℃，1～2天后再放入液氮槽中。
注意事项：
1. 欲冷冻保存的细胞应在生长良好且存活率高之状态，约为80–90％致密度。
2. 冷冻前检测细胞仍保有其*性质。
3.冷冻保护剂DMSO应为试剂级等级，无菌且无色，以5~10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。
4. 冷冻保护剂浓度为5或10%DMSO，若是不确定细胞之冷冻条件，在做冷冻保存之同时，亦应作一个backup culture，以防止冷冻失败。
请输入账号
请输入密码
请输验证码
以上信息由企业自行提供，信息内容的真实性、准确性和合法性由相关企业负责，仪表网对此不承担任何保证责任。
温馨提示：为规避购买风险，建议您在购买产品前务必确认供应商资质及产品质量。
