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大鼠elisa试剂盒原理:
采用竞争法测定金黄地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL水平。用金黄地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL抗原包被微孔板,制成固相载体,实验时依次在微孔板中加入标本及标准品,并加入HRP标记的OXLDL抗体,标本及标准品中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。反复洗涤后加底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。标本中抗体量越多,结合大鼠elisa试剂盒在固相上的酶标抗体愈少,颜色越浅。颜色的深浅和样品中的OXLDL含量呈负相关。采用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值),根据标准曲线,计算测试样品中OXLDL浓度。
大鼠elisa试剂盒操作注意:
1.不同的试剂盒因工艺和操作方法略有不同,务必按照所用大鼠elisa试剂盒说明书严格操作,否则容易产生检测结果的不确定性.
2.若不同批号大鼠elisa试剂盒的不同组分(A液或酶工作液),或不同试剂的不同组分进行交叉使用,有可能出现显色浅或本底高,花板等情形。
3.反应时间的误差,做大量标本时,一孔和后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。
4.临界值附近标本波动为正常现象,任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。
5.加样时样品量误差,对于阴或很阳的标本影响不大,但对阈值附近的标本影响,建议校对加样器。
大鼠elisa试剂盒组成结构:
一、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热量和肉毒素的试管。收集血液后,1000*g离心10分钟将血红细胞迅速小心的分离。
二、血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
三、细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
四、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
五、 保存:如果样品不立即大鼠elisa试剂盒使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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