当前位置:上海抚生实业有限公司>>生化检测试剂盒>>三羧酸循环系列>> MCA线粒体柠檬酸检测试剂盒微量法
商品介绍:
测定意义 CA是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。 配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况,(3)乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。 测定原理: CA在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰,该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。 自备仪器和用品: 可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵和蒸馏水。 |
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 200μL×1 支,4℃保存;
试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×2 瓶,4℃保存。
公司产品仅用于科研提供的生化试剂盒,质量信得过产品,售后完善。服务于高校及免疫学科研单位,竭诚为您提供更周到的服务更优质的产品。
产品名称:MCA线粒体柠檬酸检测试剂盒微量法
规格:100管/96样
检测方法:微量法
货号:FS-01S63469
操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。 1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。 3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。 4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。 5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。 7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。 |
粗酶液提取:
1、细胞或组织样品的制备: 培养细胞:先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),超声波破碎细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 2、血清(浆)样品:直接检测。 |
犬白介8(IL-8)联试剂盒Anti-INTS2 Antibody荧光Cy3标记猪IgG
犬γ干扰(IFN-γ)联试剂盒Anti-IPO9 Antibody荧光Cy3标记水貂IgG
犬转化生长因子β1(TGF-β1)联试剂盒Anti-IPMK Antibody荧光Cy3标记兔IgM
犬白介6(IL-6)联试剂盒Anti-IPPK Antibody荧光Cy3标记大鼠IgM
犬白介10(IL-10)联试剂盒Anti-IPPK Antibody荧光Cy3标记重组白介-1受体拮抗剂
犬肿瘤坏死因子α(TNF-α)联试剂盒Anti-IRF1 Antibody荧光Cy3标记血蓝蛋白
犬血管内皮生长因子(VEGF)联试剂盒Anti-IQCB1 Antibody荧光Cy3标记鸡卵白蛋白
犬纤维蛋白原(Fbg) 联试剂盒Anti-IRF4 Antibody荧光Cy3标记血白蛋白
犬脂联(ADP/Acrp30)试剂盒Anti-IQGAP3 Antibody荧光Cy3标记胰糜蛋白
犬补体因子3(C3)联试剂盒Anti-IRS1 AntibodyAlexa Fluor 555标记羊IgG(流式同型对照)
犬转铁蛋白(TRF)试剂盒Anti-IRX1 AntibodyAlexa Fluor 555标记大鼠IgG(流式同型对照)
犬结合珠蛋白(HP)联试剂盒Anti-IRX2 Antibody荧光PE-Cy7标记兔IgG(流式同型对照)
犬丝蛋白抑制因子肽抑制因子进化枝A成员1(SERPINA1)联试剂盒Anti-IRX3 Antibody辣根过氧化物标记生物
犬球蛋白E(IgE)联试剂盒Anti-ISL2 Antibody(亲和纯化) 牛IgG
犬球蛋白G(IgG)联试剂盒Anti-ITGA2 Antibody荧光标记牛血清白蛋白
MCA线粒体柠檬酸检测试剂盒微量法血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗体Human TUBGCP3 ELISA Kit对基-α-D-吡喃葡萄糖苷
谷脱羧67抗体Human TWSG1 ELISA Kit尿激
生长抑制DNA损伤基因45抗体Human DNM2(Dynamin-2) ELISA Kit
胃泌抑制肽抗体Human TUSC4 ELISA Kit吲哚
葡萄糖转运蛋白4抗体Human C19orf80(Betatrophin) ELISA Kit胞嘧
磷脂酰基蛋白聚糖-3抗体Human TTK ELISA Kit5二磷三钠盐
糖皮质受体抗体Human TTL ELISA Kit2′-脱氧腺苷-5′-二磷二钠盐
胰高血糖样肽-1抗体Human TUSC5 ELISA Kit蓝(水溶)
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