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PCR的反应条件:
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小,设定25~30个循环。
如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45~68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外,由于在60~68℃间,也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时,每kbp大体可设定30秒~1分钟;当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常,Anneal温度太高,有时会得不到扩增产物;Anneal温度太低时,容易发生非特异性反应。另外,Extension时间太短时,会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成;而Extension时间太长时,会出现Smear。
参数规格:
产品名称:转基因植物NPTII基因核酸检测试剂盒
产品规格:50T
产品货号:FS-P10542
产品分类:荧光PCR法
产品运输:低温运输
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
产品特点:
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,最终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性*定量方法,已得到的*,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
黄海海杆菌1、海洋石油污染生物修复; 2、生物活性物质筛选。模式菌株: no沉积物/热液区深海沉积物提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 821生长条件: 28℃
溶杆菌潜在的有机污染物降解菌/分离自石油富集菌群模式菌株: no沉积物/近海沉积物提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: 1001生长条件: 28℃
附球菌生长条件: 25-28℃培养基: 0014提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法
谷氨棒杆菌生长条件: 30℃培养基: 0002提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法
弧菌培养基: 33模式菌株: no秋茄根表提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 28 定期移植法
-864℃冰箱冻结;真空冷冻干燥
分枝节杆菌培养基: 820模式菌株: no沙漠提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 30℃ 真空冷冻干燥法
米根霉用于储粮微生物研究模式菌株: no大麦粒提供形式: 斜面培养物;冻干物安全等级: 1培养基: 17生长条件: 28℃
耐冷冷杆菌生长条件: 4℃培养基: 848土壤提供形式: 冻干物模式菌株: no 真空冷冻干燥法
酿酒酵母培养基: 0013海安酵母提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 25-28℃ 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法
粘性红圆酵母培养基: 436模式菌株: no土豆提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 30℃ -80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法
芽孢杆菌培养基: 33模式菌株: no木榄根表提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 28 定期移植法
-865℃冰箱冻结;真空冷冻干燥
胶韧革菌(榆耳)培养基: 0014药用、食用提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 25℃ 液氮超低温冻结法;矿物油法;定期移植法
青霉属菌产生真菌素模式菌株: no土壤提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: CM0014生长条件: 26C
CGMCC1.1641=ATCC80621模式菌株: no种属: Pseudomonas│oleovorans提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 0002生长条件: 26℃
2,5-二-3-胺 磷伯喹 3,4-二氧噻吩
2-基丁 3-基-1,2,4-三唑 二对二二聚体
5-羧尿嘧啶 卡巴他赛 [2.2]二聚对二
-2,5-二胺盐 N(omega)-甲基色胺 加拉铵
Butylated hydroxyanisole 叔丁基-4-羟基甲醚 25013-16-5
4,4'-Oxydianiline 4,4'-二基二醚 101-80-4
BENZOIN 偶姻 574-09-4
BENZOIN M 安息香甲醚 3524-62-7
大鼠整合素αM(ITGαM)ELISA试剂盒 ,英文名: ITGαM ELISA Kit
Mouse Clara cell protein (CC16) ELISA Kit 小鼠克拉拉蛋白(CC16)ELISA试剂盒
MouseIerleukin12,IL-12/P70ELISAKIT 小鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
CLIAKitforHumanGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISAKit人糖化血红蛋白A1c规格:48T/96T
无去垢剂裂解液物理裂解
ELISAKitTG大鼠甲状腺球蛋白规格:48T/96T
转基因植物NPTII基因核酸检测试剂盒苷松新23720-80-1中文别名:甘松新
英文名:Nardosinone
登录号:23720-80-1
分子式:C15H22O3
分子量:250.33
分子结构:
规格:20mg/支
纯度:≥ 98%
用途:用于含量测定/鉴定/药理实验等。
提取来源:败酱科植物甘松N. chinensis Batal的干燥根及根茎
熔点:93.5~95℃
旋光度:+27.5°(c0.20,)
药理药效:镇静、抗癫痫、抗抑郁、促神经生长、改善认知能力、保护心肌细胞、降血压、抑菌与抗疟、抗肿瘤等多种药理活。
贮存条件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
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