DNA扩增试剂盒 返回列表页

实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性*定量方法，已得到的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
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参数规格：
产品名称：DNA扩增试剂盒
产品规格：48T
产品货号：FS-P10763
产品分类：恒温扩增法
产品运输：低温运输
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
PCR的反应条件：
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。
如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。
DSM23767T=CCTCCAB2010363T=MCCC1A06153T模式菌株: yes安全等级: 1种属: Microbacterium│sediminis沉积物/表层沉积物提供形式: 斜面培养物模式菌株；微生物/耐冷、耐热、耐盐微生物培养基: 221

苏云金芽孢杆菌培养基: 141害虫生物防治提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28 定期移植法

 -1579℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

多杀性巴氏杆菌灭活疫苗和抗血清模式菌株: no肺疫猪提供形式: 冻干物安全等级: 2培养基: 56生长条件: 37

大肠埃希氏菌病生活周期及病基因表达调控的研究模式菌株: noLB培养基提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 304生长条件: 37℃

青霉菌培养基: 14模式菌株: no青蒿茎提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 25 定期移植法

白井盘多毛孢生长条件: 25培养基: 14提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no -80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法；定期移植法

印度洋大洋杆菌培养基: 471潜在的有机污染物降解菌/分离自多环芳烃(PAHs)富集菌群水样/深海底层水样提供形式: 冻干物模式菌株: no生长条件: 25℃ 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

盐单胞菌1.海洋石油污染生物修复; 2.生物活性物质筛选模式菌株: no水样/深层海水提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 821生长条件: 25℃

 -1580℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

链霉菌培养基: 0012模式菌株: no土壤提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 28℃ 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

蜡状芽孢杆菌分类学及海洋微生物研模式菌株: no沉积物提供形式: 冻干物安全等级: 2培养基: 0223生长条件: 30℃

芽孢杆菌培养基: 0223模式菌株: no泥样提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 30℃ 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型培养基: 14模式菌株: no富士苹果枝干病?单个分生孢子分离菌株提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 25 定期移植法

短芽孢杆菌培养基: 2滇池磷沉积的研究钻取滇池底泥提供形式: 斜面培养物模式菌株: no生长条件: 37℃ 真空冷冻干燥法；定期移植法

披发糖多孢菌培养基: CM0038生物转化Pravastatin提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28C 真空冷冻干燥

阿卡波糖MMP-9(matrix metalloproteinase 9)  基质金属蛋白酶-9抗原TNFAIP2  肿瘤坏死因子诱导蛋白2(TNFα-IP 2)抗体

阿卡波糖(标准品)MMP-10(matrix metalloproteinase 10)  基质金属蛋白酶-10抗原TNFAIP1  肿瘤坏死因子α诱导蛋白1抗体

阿昔洛韦,无环鸟苷MPO peptide  髓过氧化物酶抗原TNF β  肿瘤坏死因子-β抗体

阿昔洛韦,无环鸟苷(标准品)MRP2 (multidrug resistance-associated protein2)  多药耐药相关蛋白2TNF alpha  肿瘤坏死因子-α/TNFα抗体

腺苷；腺嘌呤核苷MRP5/ABCC5(Multidrug Resistanec-Associated Protein 5)  多药耐药相关蛋白5抗原TNF alpha  肿瘤坏死因子-α/TNFα抗体

腺嘌呤核苷（腺苷）（标准品）MrpL28 (mitochondrial ribosomal protein L28)  线粒体核糖体蛋白L28(抗原)TMUB1  跨膜和泛素样结构域蛋白1抗体

盐阿地芬宁MLH1(Mutl homolog l gene)  错配修复蛋白1抗原TMS1/ASC  凋亡相关斑点样蛋白ASC抗体

盐阿地芬宁(标准品)MUC5AC/Mucin 5AC(Gastric Mucin M1)  胃粘液素抗原TMPRSS5  跨膜丝氨蛋白酶5抗体

醋阿拉瑞林/氨瑞林 MTNR1B/MTNR-1B(Melatonin receptor 1B)  褪黑素受体1B抗原TMPRSS4  膜型丝氨蛋白酶2抗体

阿仑磷钠MLN(Motilin)peptide  胃动素多肽TMIGD1  跨膜TMIGD1蛋白抗体
DNA扩增试剂盒Moclobemide　吗贝胺　质量规格：>98%,BR

Moclobemide　吗贝胺(标准品)　质量规格：>98%,BR

AstragalosideIV　黄芪甲苷(标准品)　质量规格：>98%,BR

AstragalosideIV　黄芪甲苷　质量规格：>98%,BR

Nateglinide　那格列奈（标准品）　质量规格：>98%,BR

Nateglinide　那格列奈　质量规格：>98%,BR

Nateglinide　那格列奈　质量规格：>98%,BR

"(-)scopolamineN-butylbromide"　丁东莨菪 　质量规格：>98%,BR

Tannicacid　单宁,鞣,丹宁　质量规格：>98%,BR

Maraviroc　马拉韦若　质量规格：>98%,BR

Revalor-H Trenboloneacetate　群勃龙醋酯　质量规格：>98%,BR

Silibinin　水飞蓟宾(标准品)　质量规格：>98%,BR

Silibinin　水飞蓟宾　质量规格：>98%,BR

Ezetimibe　依泽替米贝;依折麦布　质量规格：>98%,BR

Ezetimibe　依泽替米贝;依折麦布(标准品)　质量规格：>98%,BR