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实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性*定量方法,已得到的*,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
参数规格:
产品名称:对虾桃拉病毒(TSV)核酸检测试剂盒
产品规格:50T
产品货号:FS-P10400
产品分类:荧光PCR法
产品运输:低温运输
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
产品特点:
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,最终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
PCR的反应条件:
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小,设定25~30个循环。
如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45~68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外,由于在60~68℃间,也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时,每kbp大体可设定30秒~1分钟;当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常,Anneal温度太高,有时会得不到扩增产物;Anneal温度太低时,容易发生非特异性反应。另外,Extension时间太短时,会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成;而Extension时间太长时,会出现Smear。
-493℃冰箱冻结;真空冷冻干燥
灰葡萄孢培养基: 14模式菌株: no发病小葱提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 20℃ 真空冷冻干燥法
放射形根瘤菌培养基: CM0014固氮菌肥。提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28℃ 真空冷冻干燥法
芽孢杆菌属培养基: CM0033模式菌株: no诺尼根提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 30℃ -80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法
44605研究模式菌株: no种属: Mycobacterium│Mycobacterium pyrenivorans提供形式: 冻干物安全等级: 3生长条件: 28 真空冷冻干燥法
HBUM84148模式菌株: no安全等级: 1种属: Streptomyces│sp.土壤提供形式: 冻干物培养基: 0012生长条件: 28℃
聚生壳菌培养基: 14模式菌株: no枝干部提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 25 定期移植法
-494℃冰箱冻结;真空冷冻干燥
芽孢杆菌培养基: 820模式菌株: no土壤提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 30℃ 真空冷冻干燥法
施氏微杆菌培养基: 472潜在的有机污染物降解菌/分离自石油富集菌群水样/下层海水提供形式: 冻干物模式菌株: no生长条件: 25℃ 液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法
酿酒酵母培养基: CM0077制面包,压榨酵母。提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28-30℃ -80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法
小单孢菌培养基: 0012模式菌株: no土壤提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 28℃ 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法
空肠弯曲杆菌培养基: 35家畜流行病调查提供形式: 斜面培养物;冻干物安全等级: 3模式菌株: no生长条件: 37℃ 液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法
柠檬假交替单胞菌培养基: 524模式菌株: no海水提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 28℃ 真空冷冻干燥法
-495℃冰箱冻结;真空冷冻干燥
结核分枝杆菌生长条件: 37℃研究提供形式: 冻干物安全等级: 3模式菌株: no 真空冷冻干燥法
抗坏血Ascorbic acidAR25g
0374-25GL-Glutamine L-谷安酰胺56-85-925g49
ABL01-25GCefotaxime,wo7ium salt 噻孢霉素钠 (头孢霉素)64485-93-425g
Protease Inhibitor Cocktail I1ml*5
N-乙酰-D-安基葡萄糖5g
异丙醇IsopropanolHPLC500ml
LBH03抗PrP单抗214
P0242-5GPenicillin G,wo7ium salt 青霉素G钠盐69-57-85g
D-生物素1g
质粒大量提取试剂盒5T
大鼠胰岛素样生长因子2(IGF2)ELISA试剂盒 ,英文名: IGF2 ELISA Kit
Mouse Neuroglobin (NGB) ELISA Kit 小鼠脑红蛋白(NGB)ELISA试剂盒
MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor,VEGFR-3ELISAkit 小鼠血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
CLIAKitforHumanC-Polypeptide,CPELISAKit人C多肽规格:48T/96T
a-淀粉酶(a-AMYLASE)活性比色法定量检测试剂盒20次
ELISAKitOT/BGP大鼠骨钙素/骨谷氨蛋白规格:48T/96T
对虾桃拉病毒(TSV)核酸检测试剂盒三尖杉宁71610-00-9英文名:Cephalomannine
英文别名:BENZENEPROPANOIC ACID, ALPHA-HYDROXY-BETA-[(2-METHYL-1-OXO-2-BUTENYL)AMINO]-,6,12B-BIS(ACETYLOXY)-12-(BENZOYLOXY)-2A,3,4,4A,5,6,9,10,11,12,12A,12B-DODECAHYDRO-4,11-DIHYDROXY-4A,8,13,13-TETRAMETHYL-5-OXO-7,11-METHANO-1H-CYCLODECA[3,4]BENZ[1,2-B]OXET-9-YL ESTER,[2AR-[2A,4,4A,6,9[R*,S*(E)],11,12,12A,12B]]-;CEPHALOMANNINE
登录号:71610-00-9
分子式:C45H53NO14
分子量:831.91
分子结构:
外观:白色结晶
规格:20 mg/支
纯度:≥ 98%
用途:用于含量测定/鉴定/药理实验等。
提取来源:红豆杉属植物红豆杉(Taxus brevifolia)的树皮
溶解性:溶于乙醇、等,微溶于等。
熔点:230~233℃
药理药效:消炎、抗肿瘤。
贮存条件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
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