马链球菌兽疫亚种（ SEZ）核酸检测试剂盒 返回列表页

参数规格：
产品名称：马链球菌兽疫亚种（ SEZ）核酸检测试剂盒
产品规格：50T
产品货号：FS-P10355
产品分类：荧光PCR法
产品运输：低温运输
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性*定量方法，已得到的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
新城疫病用于研究模式菌株: no病料提供形式: 冻结物安全等级: 2培养基: 0生长条件: 37

 -388℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

青霉培养基: 14模式菌株: no植物根际提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 28-30 定期移植法

金针菇培养基: 14栽培农艺性状研究提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 25℃ 定期移植法

红栓菌培养基: 17模式菌株: no子实体提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 28 定期移植法

 ivcas7.00750培养基: 0002模式菌株: no种属: Bacillus│thuringiensis提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 30℃ 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

谷氨棒杆菌培养基: 0002肌苷提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 30℃ 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

灰平链霉菌分类模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: 0012生长条件: 28℃

 -389℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

酿酒酵母培养基: CM0013提取海藻糖。提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 30～32℃ 矿物油法

Clostridium  cellulosi模式菌株: 未知

坚强芽胞杆菌潜在的潜在的有机污染物降解菌/分离自多环芳烃降解菌群模式菌株: no沉积物/TVG浅黄色钙质软泥提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 471生长条件: 25℃

百日咳博德特氏菌生长条件: 37℃培养基: CM0119提供形式: 冻干物安全等级: 2模式菌株: no 真空冷冻干燥法

链球菌属用于环境污水处理研究模式菌株: no污水提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: CM0002生长条件: 35℃

曲霉属活性物质；抗炎模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: CM0018生长条件: 28C

 -390℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

二甲本XyleneAR500ml

N0364pNPP4264-83-91g28

0188-500GD-Glucose anxy7nous D-无水葡萄糖50-99-7500g

EDTA Antigen Retrieval Solution

甲基橙5g

4-甲基-2-戊酮4-metxyl-2-pentenoneGCS2ml

20-1500-11.5 ml 硅化离心管207

CB2531-5GBenzamidine xy7nochloride 盐本甲脒(苄脒)1670-14-05g

刚果红5g

YNB含流铵;酵母氮源基础,无392100g

大鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷磷(NADPH)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

人腺苷三磷结合盒转运体G2(ABCG2)免疫试剂盒 Human ABCG2 ELISA Kit

抗坏血氧化酶(AAO)活性测试盒 可见分光光度法 50管/48样

Ratmonocytechemotacticprotein2,MCP-2ELISA试剂盒大鼠单核趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA试剂盒规格：96T/48T

HumanhepatitisBvirusXAg,HBxAgELISA试剂盒人乙型肝炎病X抗原(HBxAg)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Humanlowmolecularweightheparin,LMWHELISAKit人低分子肝素(LMWH)ELISA试剂盒规格：96T/48T
马链球菌兽疫亚种（ SEZ）核酸检测试剂盒SCDLP液体培养基管规格：5ml*20支用途：用于化妆品的样品制备以及前增菌

CAYE培养基规格：250g用途：用于致病性大肠埃希氏菌的分离培养基

酪蛋白胨大豆卵磷脂吐温20培养基规格：250g用途：用于药品（含防腐剂）的中和剂

磺胺甲噁唑/甲氧苄啶药敏纸片 别名：复方新诺明规格：23.75ug/1.25ug/片，20片/瓶拉丁属名：Trimethoprim/Sulfamethoxazole（SXT）

氨曲南药敏纸片规格：30μg/片，20片/瓶拉丁属名：Aztreonam（AZT）

乳酚棉蓝染色液规格：5ml*8用途：用于真菌染色
PCR的反应条件：
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。
如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。