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糖原磷酸化酶a(GPa)测试盒微量法

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更新时间:2022-08-19 21:39:06浏览次数:117次

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货号 BJ-01611378-1
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血细胞亚群流式分析试剂专题

特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。

产品名称

检测方法

规格

货号

糖原磷酸化酶a(GPa)测试盒微量法

微量法

100管/96样

BJ-01611378-1

商品介绍:

测定意义:

糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代谢的关键酶,使糖原分子从非还原端逐个断开α-1,4-糖苷键移去葡萄糖基,释放1-磷酸葡萄糖,直至临近糖原分子α-1,6-糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和无活性的糖原磷酸化酶b(GPb)两种形式。糖原的分解主要在GPa的催化下进行。

测定原理:

未添加激活剂时,GPa催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH,在340nm下测定NADPH上升速率,即可反映GPa活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

优点如下:

1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。

2、取样量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可测红细胞中的SOD,只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD,0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。

3、灵敏度高:IC50=0.05g/ml,是邻苯三酚法的18倍。

4、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。

5、再现性好:变异系数CV=1.7%。

6、回收试验: X =103.3%。

7、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。

8、测试面广:可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等,效果均佳。

10.png 

测定步骤:

1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。

2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。

3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)

4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。

5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)充分混匀,室温静置30min后,450nm处测定各管吸光值A。

注意事项:

待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。

一个试剂盒如果不能在3次内使用完毕,其中的WST-8需要在使用时适当分装,以避免反复冻融导致的检测效果下降。

标准品稀释时所用的稀释液应尽量与样品一致。样品用试剂盒提供的SOD样品制备液制备时,标准品也宜使用SOD样品制备液进行稀释;当样品为血液等无需处理的样品时,宜使用试剂盒提供的SOD检测缓冲液稀释标准品。

抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色,如果设置了使用说明中的空白对照3,就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。

一氧化氮合成酶-2抗体(诱导型)假单胞菌属对羟基

干扰suα6抗体平菇新农1号聚乙二4000

整合suβ2/Integrin β2抗体沙针草状孢菌一缩二

抑制suA/Inhibin βA抗体灰红链霉菌4-氨基苯乙酮

胰岛su受体底物-3抗体茄拉尔氏菌苯并蒽酮

胰岛su受体底物p53蛋白抗体胶质芽孢杆菌*三苯基

胰岛su受体底物-1抗体酿酒酵母硫suan银

胰岛su受体底物-2抗体红法夫酵母*2-氨基噻唑

胰岛su受体底物-4抗体布莱克威尔假丝酵母天麻su

白介su14抗体猪丹丝菌suan枣仁皂苷 B

肿瘤凋亡ASPP家族的另一个成员抗体枯草芽孢杆菌生姜油

Caspase激活的脱氧核糖核suan酶抑制剂抗体马肠链球菌荭草苷

胰岛su受体α抗体木蹄层孔菌23-乙酰泽泻B

整合suα3β1抗体苏云金芽孢杆菌黄柏酮

整合suβ7抗体弗雷德里克斯堡假单胞菌薄芝菌丝体粉
糖原磷酸化酶a(GPa)测试盒微量法丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)试剂盒 Anti-CEP97 Antibody抑癌蛋白DKK1抗原

核孔蛋白37kda(NUP37)试剂盒Anti-CEP97 AntibodyDMBT1抑癌基因抗原

乳脂球表皮生长因子8 (MFG-E8)试剂盒 Anti-CERS4 AntibodyDNA依赖蛋白激酶催化亚基多肽抗原

游离睾酮(F-TESTO)试剂盒 Anti-CES2 Antibody多能发育相关基因2抗原

微精蛋白β(MSMβ)试剂盒Anti-CGREF1 Antibody死亡受体4抗原

三肽基肽酶I(TPP1)试剂盒Anti-CHAF1A Antibody肿瘤调亡su/死亡受体5抗原

骨成型蛋白3(BMP-3)试剂盒 Anti-CHAF1B Antibody桥粒斑蛋白1抗原   

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐。

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后


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